Enzymimmunoassay mit Aufschlüsselung der Indikatoren

Dank der Entwicklung der modernen Medizin muss sich der Arzt bei der Diagnose nicht mehr auf indirekte Manifestationen von Krankheiten konzentrieren oder mehrstufige Laborstudien durchführen. Es reicht aus, eine Analyse durchzuführen, die die angebliche Erstdiagnose bestätigt oder widerlegt..

Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA) ist diese Methode. Mit dieser Studie können Sie spezifische Antikörper und Antigene nachweisen, die einer Vielzahl von Pathologien inhärent sind, was die Diagnose erheblich beschleunigt.

Was ist IFA?

Die ELISA-Analyse ist ein Labortest (Methode), mit dessen Hilfe das Vorhandensein oder Fehlen bestimmter Antikörper im Körper zur Bekämpfung des Virus und ihrer Anzahl bestimmt werden kann.

Grundlage der Studie ist die natürliche Reaktion eines Antigens (eines für den Körper schädlichen Objekts) - eines Antikörpers (eines Proteins, das schädliche Objekte zerstört), mit dem das Vorhandensein einer Vielzahl von Viren und Bakterien nachgewiesen werden kann.

ELISA ist eine natürliche Immunantwort des Körpers - die Wechselwirkung eines Antikörpers mit dem entsprechenden Antigen. Während des ELISA werden Antigene oder Antikörper abwechselnd mit dem Material in das Röhrchen gegeben, wonach die Konzentration der resultierenden Antigen-Antikörper-Komplexe nachgewiesen wird.

Wenn Zufälle gebildet werden, entstehen Immunkomplexe, dann findet eine enzymatische Reaktion des Farbstoffs mit dem kombinierten Molekül statt. Es ist auf die Farbänderung während der enzymatischen Indikation zurückzuführen, dass die Krankheit nach Untersuchung des Spiegels der nachgewiesenen Verbindung identifiziert wird.

Arten von Immunglobulinen

Humane Immunglobuline unterscheiden sich in mehrere Klassen, die sich in Eigenschaften, Struktur und antigenen Eigenschaften schwerer Ketten (H-Ketten) voneinander unterscheiden. Bei allen Säugetieren, einschließlich Menschen, werden fünf H-Ketten isoliert, die die Zugehörigkeit von Immunglobulinen zur entsprechenden Klasse bestimmen: G, M, A, D, E..

Jede Klasse unterscheidet sich in ihren biologischen Eigenschaften, ihrer Fähigkeit, Antigene zu binden, sowie in der Geschwindigkeit und Stärke ihrer Bindungen an das Molekül..

Die Funktionen jedes Immunglobulins (lg) sind unterschiedlich:

Menge im KörperFunktionenHalbwertszeit (Tage)Wert
G70%Passive Immunität beim Neugeborenen bilden;

notwendig für eine Immunantwort

Verbesserung der Phagozytose,

21-24bieten lang anhaltende humorale Immunität bei Infektionskrankheiten
M.5-10%benötigt, um die Phagozytose zu aktivieren,

in der Lage, 5 Antigenmoleküle zu binden,

fünfBietet eine primäre Immunantwort
UND10-15Neutralisieren Sie Toxine und Viren

benötigt für die Bildung der frühen Immunität

Lokale Immunitätserziehung

4-5Schleimhautschutz
E.0,2%verursachen Allergien und Anaphylaxie aktivieren Gewebe-Basophile2Parasitenschutz
D.0,2%beteiligt an der Produktion von Lymphozyten, die als Membranrezeptor für Antigene notwendig sind;3Ihre Rolle ist wenig verstanden.

Das Auftreten von Immunglobulinen erfolgt in einer Art "Kette" - IgM IgG. So reagiert der Körper auf das Auftreten von Antigen im Körper. Während der Labordiagnose wurde eine Bewertung der Konzentration von drei Haupt-Immunglobulinen - G, M, A - durchgeführt.

Indikationen zur Immunglobulinanalyse

Die ELISA-Analyse wird von Jahr zu Jahr beliebter..

Eine solche Studie beschleunigt die Diagnose, und dies ist sehr wichtig für die Behandlung von Pathologien wie:

  • Virushepatitis;
  • HIV infektion;
  • Cytomegalovirus,
  • Epstein Barr Virus,
  • Herpesvirus,
  • Masern
  • Röteln,
  • Tuberkulose,
  • Salmonellose,
  • Ruhr,
  • durch Zecken übertragene Enzephalitis,
  • Helicobacter-Bakterien,
  • Borreliose,
  • Tetanus,
  • Syphilis,
  • Diphtherie,
  • Leptospirose,
  • Chlamydien,
  • Ureaplasmose,
  • Mykoplasmose,
  • Keuchhusten.

Mit der Analyse können Sie auch die Infektion mit Parasiten bestimmen:

  • Plattwürmer
  • Spulwurm
  • histologische Amöbe,
  • Leberzitaden,
  • Lamblia,
  • Toxoplasma,
  • Trichine,
  • hepatisch,
  • Cestodosen.

ELISA ist eine Art Marker für Autoimmunerkrankungen und maligne Neoplasien.

Vorbereitung auf den Test

Zur Vorbereitung der Studie sollten Sie folgende Regeln einhalten:

  • Einen Tag vor der Blutentnahme dürfen Sie nicht rauchen und Alkohol trinken,
  • Nehmen Sie nicht an Sport oder anderen körperlichen Aktivitäten teil,
  • versuche Stress zu vermeiden,

Bevor Sie eine ELISA-Analyse bestehen, müssen Sie Stress vermeiden.

  • Beenden Sie den Drogenkonsum spätestens 10 Tage vor der Manipulation.
  • Ärzte empfehlen auch eine spezielle Diät - schließen Sie fetthaltige und frittierte Lebensmittel aus. Wenn die Studie auf Hepatitis durchgeführt wird, müssen Sie kein Orangengemüse und insbesondere keine Zitrusfrüchte verwenden. Morgens Blut auf leeren Magen spenden.

    Eine falsch positive Analyse ist auf unerfüllte Empfehlungen zurückzuführen, insbesondere auf die Verwendung von fetthaltigen Lebensmitteln, was zu einer zu hohen Konzentration von Triglyceriden im Plasma führt, wodurch die Leitfähigkeit des ELISA abnimmt.

    Probenahmeverfahren

    Als Testmaterial kann Vollblut, Serum oder venöses Blutplasma verwendet werden. Materialprobenahme, üblicherweise aus der Ulnarvene, hierfür werden eine Einwegnadel und ein Vakuumröhrchen verwendet, 5-10 ml Blut werden benötigt.

    Für die Genauigkeit des Ergebnisses ist es wichtig, die richtige Probenahmetechnik einzuhalten - die Punktion des Gefäßes selbst und des umgebenden Gewebes muss mit einer Manipulation durchgeführt werden. Daher wird eine kurze Nadel mit großem Durchmesser verwendet, damit die gegenüberliegende Wand der Vene nicht verletzt wird und die roten Blutkörperchen nicht beschädigt werden.

    Um die Unversehrtheit der roten Blutkörperchen zu erhalten, muss das Blut durch die Wände des Röhrchens fließen.

    Während der Lagerung des Materials sollte eine mögliche Ionisierung vermieden werden. Außerdem sollte das Material nicht mit den Resten von Desinfektionsmitteln in Kontakt kommen. Daher wird nur ein Einweg-Kunststoffschlauch mit dem Namen, dem Datum und der Uhrzeit der Lieferung des Materials des Patienten verwendet.

    Wenn eine kurze Lagerung des Testmaterials erforderlich ist, wird ein Kühlschrank mit einer Temperatur von 2 bis 4 ° C verwendet. Wenn eine längere Lagerung erforderlich ist, wird das Material bei einer Temperatur von -20 ° C eingefroren.

    Wie erfolgt die Analyse?

    Nach der Vorbereitung des Testmaterials fährt der Laborassistent mit den erforderlichen Manipulationen fort. Hierzu werden eine Reihe spezieller Antigensätze verwendet, die es ermöglichen, die Reaktion des Körpers auf einen Reizstoff zu provozieren. Hierbei handelt es sich um verschiedene Infektionen, Hormone und Allergene.

    Das erwartete Antigen-Antikörper-Reaktionsschema sieht ungefähr so ​​aus:

    • Die primäre Reaktion ist nachweisbares Ig (Ab) und gereinigtes Pathogenantigen (Ag)..
    • Um die resultierenden Immunkomplexe nachzuweisen, folgt eine neue immunologische Reaktion, bei der das spezifische spezifische Ig als Antigen und das Konjugat-Ig (Ab) als Antikörper dafür fungiert.
    • Der letzte Schritt ist eine enzymatische Reaktion zusammen mit einem Katalysatorkonjugatmolekül. Das Substrat ist ein Chromogen (nicht gefärbt), das sich im Verlauf der Reaktion färbt, und die Farbintensität bestimmt den quantitativen Indikator des Immunglobulins in der Probe.

    Derzeit wurden viele verschiedene ELISA-Optionen entwickelt, und es gibt keine eindeutige Klassifizierung. Typischerweise werden Methoden auf der Grundlage der Trennung in heterogene und homogene Methoden betrachtet - alle Phasen der Analyse erfolgen unter Verwendung einer festen Phase oder nur unter Verwendung einer Lösung.

    Moderne klinische Diagnoselabors verwenden normalerweise einen heterogenen (Festphasen-) ELISA. In diesem Fall bedeutet die Festphase die Absorption von Antigenen oder Antikörpern auf der festen Oberfläche von speziellen Vertiefungen, die sich auf einer Polystyrol-Mikroplatte befinden. Die Methode ist in direkten und indirekten ELISA unterteilt.

    Bei einem direkten ELISA fixiert sich das eingeführte Antigen während des Inkubationsprozesses auf der Oberfläche leerer Vertiefungen. Dazu werden die untersuchten Proben des Materials 20 bis 25 Minuten lang in saubere Vertiefungen gegeben. Dies ist erforderlich, um das Antigen an ihrer Oberfläche zu befestigen. Danach werden die notwendigen Antikörper hinzugefügt. Ferner bleibt das Material für eine bestimmte Zeit, um Bindungen zu bilden.

    Antikörper werden immer im Überschuss zugesetzt. Selbst wenn sie vorhanden sind, verbleiben ungebundene Antigene in der Probe, und wenn überhaupt keine Antigene vorhanden sind, gibt es keine Bindungen. Um die "zusätzlichen" Antikörper zu entfernen, wird eine Dekantierung durchgeführt, wonach nur diejenigen Antikörper übrig bleiben, die eine Verbindung mit dem Antigen hergestellt haben.

    Danach folgt eine enzymatische Reaktion - Zugabe einer Lösung des Enzyms zu den Vertiefungen, wonach die erhaltenen Bindungen gefärbt werden.

    Bei der indirekten ELISA-Methode sind die verwendeten Antikörper mit dem Substrat der enzymatischen Reaktion vorverbunden; In diesem Fall erfolgt die Bindung von Antikörpern an das Antigen während des Inkubationsprozesses, wonach eine Mobilisierung von Bindungen auf der Oberfläche der Vertiefungen erfolgt und das nach der Reaktion eingeführte konjugierte und substratchromogene Reagenz die Reaktion färbt.

    Daher besteht der Hauptunterschied zwischen der indirekten Methode und der direkten Methode nicht darin, das Material an die Oberfläche der sauberen Vertiefungen zu kleben, sondern an das auf der Tablette immobilisierte Antigen zu binden.

    Die Reaktion stoppt unter Verwendung spezieller Vorrichtungen, dann wird jede Vertiefung einem photometrischen Prozess unterzogen, gefolgt von einer vergleichenden Beschreibung des Ergebnisses, das mit zuvor durchgeführten Kontrollproben erhalten wurde.

    Wird in der Probe eine Zunahme der optischen Dichte festgestellt, wird auch die Konzentration spezifischer Antikörper im Testergebnis überschätzt..

    Wann wird die Analyse fertig sein?

    Die Studie dauert nicht viel Zeit, von der Blutentnahme bis zur Erzielung des Ergebnisses. Je nach diagnostischen Maßnahmen dauert sie 1 bis 10 Tage.

    Testergebnisse und deren Interpretation

    Ein negatives oder positives Ergebnis für bestimmte Klassen von Immunglobulinen ist auf dem Formular angegeben, das der Patient als Ergebnis der Diagnose erhalten hat, und ein quantitativer Indikator für verschiedene Klassen von Antikörpern ist ebenfalls angegeben.

    Unterschiedliche Interpretationen der Ergebnisse sind möglich:

    1. IgM (+) (IgA, IgG nicht bestimmt) - der Heilungsprozess;
    2. IgM (-); IgG (+), IgA (+) - chronische infektiöse Pathologie;
    3. IgM, IgG, IgA (alle mit - Wert) - fehlende Schutzmechanismen für Infektionen;
    4. IgG (+/-) und IgA (+/-), IgM (+) - ein akuter Prozess;
    5. IgM (-), IgA (-), IgG (+) - postinfektiöse Immunität;
    6. IgM, IgG, IgA (+) - chronische Pathologie im akuten Stadium.

    Wenn beispielsweise IgG und IgM nachgewiesen wurden, kann der Patient eine der folgenden Krankheiten haben:

    • Virushepatitis;
    • Cytomegalovirus;
    • Herpes;
    • Windpocken;
    • Chlamydien
    • Staphylokokken- oder Streptokokkeninfektion.

    Für hormonelle Studien wird häufig ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay verschrieben. Die Normen sind in der Tabelle aufgeführt:

    Hormon NameFußbodenNorm
    1Thyreoglobulinm / wBis zu 70 IE / ml
    2Thyroxinm / w64-146 nmol / l
    3Triiodthyroninm / w1,8-2,8 nmol / l
    4Thyroxin freim / w11-25 pmol / l
    fünfFreies Triiodritoninm / w4,49-9,3 pmol / l
    6Testosteron, DehydrotestosteronF.0,5-10 mU / l

    Die ELISA-Analyse ist eine diagnostische Studie, mit der Sie die Wahrscheinlichkeit der Bildung von Krebspathologien beurteilen können. Die Interpretation der Ergebnisse erfolgt jedoch nur durch den behandelnden Arzt.

    Der Wert der Testergebnisse

    ELISA eignet sich zum Nachweis verschiedener Formen von Genitalinfektionen, einschließlich Syphilis, und wird häufig zum Screening schwangerer Frauen verwendet..

    Dank dieser Studie können Sie herausfinden, wie lange die Infektion und das Stadium der Krankheit zum Zeitpunkt der Studie aufgetreten sind:

    • Immunglobuline M geben die Dauer der Krankheit an;
    • IgA - der Patient wurde vor mehr als 30 Tagen infiziert;
    • IgG wird auf dem "Höhepunkt" von Krankheiten oder zu dem Zeitpunkt gefunden, an dem die Therapie vor kurzem beendet wurde.

    Während der Studie bleiben die Vertiefungen auf der Tablette mit einem negativen Indikator farblos und die positiven sind hellgelb gefärbt. Wenn die Farbe der positiven Vertiefungen nicht mit der Farbe der Kontrolle übereinstimmt, wird das Ergebnis als zweifelhaft angesehen und eine erneute Untersuchung ist erforderlich..

    Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay ist der erste Schritt bei der Diagnose von HIV. Es ist unmöglich, die Analyse unmittelbar nach der angeblichen Infektion durchzuführen. Es muss bis zum Ende der Inkubationszeit (von 14 Tagen bis 6 Monaten) gewartet werden..

    Im Verlauf der Analyse werden Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2 bestimmt, eine Suche nach Antikörpern der Klasse G, die üblicherweise zu einem späteren Zeitpunkt auftritt, und Antikörper der Klassen A und M können in den frühen Stadien (während der Inkubationszeit) bestimmt werden..

    Nach Erhalt positiver Proben sollte Folgendes sein:

    • Wenn der erste Test ein positives Ergebnis ergab, wird das Blut erneut von einem anderen Laborassistenten überprüft.
    • Das wiederholte positive Ergebnis beinhaltet die Rücknahme von Material,
    • Bei Wiederholung des Ergebnisses wird dem Patienten ein Immunoblot zugewiesen.

    Die endgültige Schlussfolgerung über das Vorhandensein einer HIV-Infektion wird erst nach dem Ergebnis des Immunoblots gezogen.

    Der ELISA wird auch als diagnostische Studie zur Tuberkulose verwendet. Selbst wenn der Patient sogar Antikörper gegen diese Pathologie aufweist, bestätigt dies nicht immer das Vorhandensein von Tuberkulose. Daher wird der ELISA häufig als Klärungstechnik oder zur Diagnose einer verborgenen extrapulmonalen Form verwendet.

    Die ELISA-Analyse ist eine solche Studie, mit der Sie eine Infektion eines Patienten mit Parasiten und Protozoen nachweisen können. Während der Diagnose können Sie sogar den Zeitpunkt der Infektion bestimmen.

    ChlamydienCytomegalovirusParasiten
    IgM - 7 Tage nach der Infektion nachgewiesen,IgM werden 30-45 Tage nach der Infektion oder während der Reaktivierung der Infektion für 4-6 Monate nachgewiesenDie Studie bestimmte IgME.

    IgG - chronisches Stadium der Invasion

    IgA - Infektion trat vor mehr als 30 Tagen auf
    Die IgG-Invasion befindet sich in der akuten Phase
    IgG - bestätigt die Diagnose und zeigt die Wirksamkeit der Therapie

    Vor- und Nachteile der Analyse

    IFA hat viele Vorteile, was seine Beliebtheit bei Ärzten und Patienten erklärt:

    • hohe Genauigkeit des Ergebnisses,
    • bezahlbarer Preis,
    • schnelles Ergebnis,
    • Identifizierung des Krankheitsstadiums,
    • Dynamik der Krankheitsbekämpfung.

    Neben den Vorteilen gibt es jedoch einen Nachteil: In seltenen Fällen ist die Analyse falsch positiv oder falsch negativ.

    Warum das Ergebnis möglicherweise unzuverlässig ist

    Fehler können aufgrund technischer Verstöße auftreten, die Analyse ist auch bei Menschen mit einigen chronischen Erkrankungen (Rheumafaktor) unzuverlässig, für die die Produktion spezifischer Antikörper charakteristisch ist.

    Das Endergebnis wird auch durch die Verwendung von Patientenmedikamenten und Stoffwechselstörungen beeinflusst. Aus diesen Gründen muss ein positives HIV- und onkologisches Testergebnis erneut getestet werden..

    Forschungskosten

    Der Preis für ELISA variiert je nach Diagnoserichtung (Rubel):

    • Hepatitis 250-900;
    • Viren - 250-1000;
    • HIV - 250-350;
    • Helminthenbefall - 280 - 900;
    • Syphilis -150-250;
    • Pilzinfektionen 400-500.

    Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay ist eine der effektivsten Methoden zur Untersuchung einer Vielzahl von viralen Pathologien, parasitären Infektionen und onkologischen Pathologien. Eine Studie wie der ELISA erleichtert die Diagnose erheblich. Diese Analyse sollte jedoch nicht vom Patienten selbst interpretiert werden, sondern nur von einem Arzt behandelt werden.

    Gepostet von: Bacio

    Artikelgestaltung: Oleg Lozinsky

    Enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA, ELISA). Die Essenz, das Prinzip der Methode und die Phasen der Studie. Analyse auf Antikörper, Antikörperklassen, Immunkomplex.

    Im Zusammenhang mit der Entwicklung von Zelltechnologien, Molekularbiologie, Genetik, Physik, Chemie und einer Reihe anderer High-Tech-Disziplinen werden neue hochpräzise und High-Tech-Methoden in die tägliche Praxis eingeführt. Diese interdisziplinären Trends betreffen sowohl den Bereich des medizinischen Wissens als auch verwandte Bereiche biologischer, biochemischer Probleme. In den letzten zehn Jahren hat sich eine Methode der klinischen Labordiagnostik namens Enzymimmunoassay verbreitet und in die Massenpraxis eingeführt..

    Im Allgemeinen sind Technologien für immunologische enzymatische und radiologische Reaktionen seit den frühen 80er Jahren des 20. Jahrhunderts bei der Typisierung von Zellen, Zellkulturen und verschiedenen Geweben weit verbreitet. Diese Methoden waren jedoch sehr zeitaufwändig, nicht einheitlich, nicht standardisiert, was ihre Verwendung für therapeutische und diagnostische Zwecke in Scharen ausschloss. Nur enge, hochtechnologische und hochspezialisierte Labors verwendeten diese Methoden..

    Mit der Entwicklung von Technologie, Mikrotechnologie und der Herstellung verschiedener Biopolymermaterialien wurde es jedoch möglich, fertige Sätze von Enzymimmunoassay-Diagnostika herzustellen, die von Laboratorien medizinischer Einrichtungen mit breitem Profil verwendet werden können. ELISA wird häufig zur Diagnose aller Arten von Infektionen (Chlamydien, Syphilis, Cytomegalievirus, Toxoplasmose, Herpes usw.) verwendet, sowohl akute als auch chronische sowie latente Formen, die ohne klinische Symptome auftreten. Diese Methode wird auch zur Kontrolle chronischer Infektionen verwendet Krankheiten. Versuchen wir herauszufinden, was diese Methode ist und welche Prinzipien ihr zugrunde liegen.?

    Enzymgebundene Immunosorbens-Assay-Komponenten - Immunantwort und enzymatische Reaktion

    Was ist eine Immunantwort? Was ist ein Antikörper, Antigen?

    Was ist eine Immunantwort? Was ist Antigen??
    Zunächst werden wir analysieren, was Immunreaktionen sind. Immunreaktionen sind spezifische Reaktionen der Bindung eines Antigens an einen Antikörper unter Bildung eines Immunkomplexes. Was bedeutet das? Auf der Oberfläche jeder Zelle eines Organismus befinden sich spezielle Strukturen, die als Antigene bezeichnet werden. Antigene sind im Allgemeinen Moleküle, die Informationen über eine Zelle enthalten (ähnlich wie Informationen auf dem Abzeichen einer Person, die die Basisdaten dieser Person angeben)..

    Einzel- und Speziesantigene - was ist das? Warum werden diese Antigene benötigt??

    Es gibt einzelne Antigene, die nur diesem bestimmten Organismus eigen sind. Diese einzelnen Antigene sind für alle Menschen unterschiedlich, sie sind einander ähnlich, aber immer noch unterschiedlich. Zwei identische Kopien einzelner Antigene existieren in der Natur nicht!

    Der zweite Haupttyp von Antigenen sind Speziesantigene, die einem bestimmten Typ von Lebewesen inhärent sind. Zum Beispiel hat eine Person ihr eigenes Speziesantigen, das allen Menschen gemeinsam ist, Mäuse haben ihr eigenes Mausspeziesantigen usw. Auf der Oberfläche jeder Zelle ist notwendigerweise ein spezifisches und individuelles Antigen vorhanden.

    Speziesantigen wird von Zellen des Immunsystems verwendet, um "Freund oder Feind" zu identifizieren..

    Wie die Antigenerkennung erfolgt?

    Eine Immunzelle bindet an eine verdächtige Zelle und identifiziert ein einzelnes Antigen. Im Gedächtnis der Immunzelle wird „aufgezeichnet“, wie „ihr Antigen“ aussieht. Wenn also das Antigen einer verdächtigen Zelle mit der Beschreibung von „ihrem Antigen“ übereinstimmt, stellt diese Zelle ihres eigenen Organismus keine Gefahr dar. Dann "löst" sich die Immunzelle und geht. Und wenn das Antigen nicht mit der Beschreibung von "unserem" übereinstimmt, identifiziert die Immunzelle diese Zelle als "fremd", was bedeutet, dass sie möglicherweise für den gesamten Organismus gefährlich ist. In diesem Fall "löst" die Immunzelle nicht, sondern beginnt das gefährliche Objekt zu zerstören. Die Genauigkeit einer solchen immunologischen Erkennung ist erstaunlich - 99,97%. Es gibt praktisch keine Fehler!

    Was ist ein Antikörper, Immunkomplex?
    Und was ist ein Antikörper??

    Ein Antikörper ist ein spezielles Molekül, das sich auf der Oberfläche einer Immunzelle befindet. Es ist der Antikörper, der an die Antigene der verdächtigen Zelle bindet. Ferner überträgt der Antikörper Informationen in die Zelle, in der die Erkennung stattfindet, und empfängt ein Rücksignal von zwei Arten von "eigenen" oder "fremden". Wenn das Signal "eigenen" Antikörper die Verbindung mit dem Antigen zerstört und die Zelle freisetzt.

    Was ist der Immunkomplex??
    Wenn das Signal „fremd“ ist, entwickelt sich die Situation anders. Der Antikörper unterbricht nicht die Verbindung mit dem Antigen, sondern sendet durch das Senden spezifischer Signale eine "Verstärkung". Biologisch bedeutet dies, dass andere Antikörper, die sich in einem anderen Teil der Zelle befinden, sich in den Bereich bewegen, von dem das Gefahrensignal stammt, und auch eine Verbindung zwischen sich und dem eingefangenen Antigen herstellen. Am Ende scheint das Antigen allseitig umgeben und fest gebunden zu sein. Ein solcher Antigen + Antikörper-Komplex wird als Immunkomplex bezeichnet. Ab diesem Moment beginnt die Antigenverwertung. Aber jetzt interessieren uns die Details des Antigenneutralisationsprozesses nicht mehr..

    Arten von Antikörpern (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
    Antikörper sind Proteinstrukturen, die dementsprechend einen chemischen Namen haben, der als Synonym für das Wort Antikörper verwendet wird. Antikörper = Immunglobuline.

    Es gibt 5 Arten von Immunglobulinen (Ig), die an verschiedenen Stellen des menschlichen Körpers (z. B. auf der Haut, auf den Schleimhäuten, im Blut usw.) an verschiedene Arten von Antigenen binden. Das heißt, Antikörper haben eine Arbeitsteilung. Diese Immunglobuline werden Buchstaben des lateinischen Alphabets - A, M, G, D, E - genannt und wie folgt bezeichnet: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

    Bei der Diagnose wird nur ein Antikörpertyp verwendet, der in Bezug auf die bestimmte Mikrobe am spezifischsten ist. Das heißt, die Bindung dieses Antikörpertyps an das nachgewiesene Antigen erfolgt immer. Am häufigsten werden IgG und IgM verwendet.

    Es ist dieses Prinzip der Immunantwort (die einzigartige Genauigkeit und Spezifität der Erkennung eines definierten biologischen Objekts), das dem Enzymimmunoassay zugrunde liegt. Aufgrund der hohen Genauigkeit von Antikörpern bei der Erkennung von Antigenen ist auch die Genauigkeit des gesamten Enzymimmunoassays am höchsten..

    Enzymatische Reaktion

    Was ist eine enzymatische Reaktion? Was ist Affinität, Substrat und Reaktionsprodukt?
    Wir betrachten die enzymatische Reaktion bei der Methode des Enzymimmunoassays.

    Was ist eine enzymatische Reaktion??

    Eine enzymatische Reaktion ist eine chemische Reaktion, bei der eine Substanz durch die Wirkung eines Enzyms in eine andere umgewandelt wird. Die Substanz, auf die das Enzym einwirkt, wird als Substrat bezeichnet. Und die Substanz, die durch die Wirkung des Enzyms erhalten wird, wird als Reaktionsprodukt bezeichnet. Darüber hinaus ist die Besonderheit der enzymatischen Reaktion derart, dass ein bestimmtes Enzym nur auf ein bestimmtes Substrat wirkt. Diese Eigenschaft eines Enzyms, „sein“ Substrat zu erkennen, wird als Affinität bezeichnet..

    Somit führt jedes Enzym nur eine spezifische Reaktion durch. In der biologischen Welt sind sehr viele Enzyme sowie enzymatische Reaktionen bekannt. Im Enzymimmunoassay werden nur wenige enzymatische Reaktionen verwendet - nicht mehr als 10. Gleichzeitig wurden enzymatische Reaktionen ausgewählt, deren Produkt farbige Substanzen sind. Warum sollten die Produkte der enzymatischen Reaktion gefärbt werden? Denn um die Konzentration einer Substanz aus einer farbigen Lösung zu berechnen, gibt es eine einfache chemische Methode - die Kolorimetrie.

    Kolorimetriemethode - die Essenz und das Prinzip

    Die Farbmetrik verwendet eine Messung der Farbdichte einer Lösung, und die Konzentration einer Substanz wird aus der Farbdichte berechnet. Ein spezielles Gerät, ein Kolorimeter, misst die Farbdichte einer Lösung. In der Kolorimetrie sind zwei Varianten der Abhängigkeit der Farbdichte von der Konzentration eines Stoffes möglich - dies ist eine direkt proportionale Abhängigkeit oder eine umgekehrt proportionale Abhängigkeit. Bei einer direkt proportionalen Abhängigkeit ist die Farbdichte der Lösung umso intensiver, je höher die Konzentration der Substanz ist. Wenn umgekehrt proportional, ist die Farbdichte der Lösung umso geringer, je höher die Konzentration der Substanz ist. Technisch geschieht dies wie folgt: Es werden mehrere Lösungen mit einer bekannten Konzentration einer Substanz genommen, die Dichte dieser Lösungen wird gemessen, ein Diagramm der Konzentration gegenüber der Farbdichte wird erstellt (Kalibrierungsdiagramm)..

    Dann wird die Farbdichte der Lösung bestimmt, deren Konzentration bestimmt wird, und das Konzentrationsdiagramm, das dem Niveau der gemessenen Dichte der Farbe der Lösung entspricht, wird aus dem Kalibrierungsdiagramm ermittelt. In modernen automatischen Farbmessgeräten kalibrieren sie nur einmal, dann erstellt das Gerät selbst eine Kalibrierungskurve, die im Speicher des Geräts verbleibt, und geschieht automatisch.

    Im Enzymimmunoassay werden am häufigsten die folgenden Enzyme verwendet: Peroxidase, alkalische Phosphatase, Avidin.

    Wie werden immunologische und enzymatische Reaktionen in einem Enzymimmunoassay kombiniert? Nun werden wir den enzymgebundenen Immunosorbens-Assay selbst untersuchen. Welche Phasen umfasst es und was passiert während dieser Reaktionen? Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay ist direkt und indirekt.

    Enzymgebundener Immunosorbens-Assay - Stadien

    In einem direkten enzymgebundenen Immunosorbens-Assay werden Antikörper gegen ein nachweisbares Antigen verwendet, das an eine spezifische Markierung gekoppelt ist. Diese spezifische Markierung ist das Substrat der enzymatischen Reaktion..

    Die Anlagerung von Antigenen an die Oberfläche des Lochs und die Verbindung von Antigen mit Antikörper

    Wie wird ein direkter Enzymimmunoassay durchgeführt? Biologisches Material (Blut, Schleimhautabkratzer, Abstriche) wird entnommen und in spezielle Löcher gegeben. Biologisches Material wird 15 bis 30 Minuten in den Vertiefungen belassen, damit die Antigene an der Oberfläche der Vertiefungen haften können. Als nächstes werden Antikörper gegen das nachweisbare Antigen in diese Vertiefungen gegeben. Dies bedeutet, dass beim Nachweis von Antigenen, beispielsweise Syphilis, Antikörper gegen Syphilis-Antigene hinzugefügt werden. Diese Antikörper werden industriell gewonnen und die Labors kaufen fertige Kits. Diese Mischung aus Testmaterial und Antikörpern bleibt einige Zeit (von 30 Minuten bis 4 bis 5 Stunden), damit die Antikörper ihr „eigenes“ Antigen finden und kontaktieren können. Eine Probe von Antigenen, je mehr Antikörper sie kontaktieren.

    Entfernung von "überschüssigen" Antikörpern

    Wie angegeben, sind Antikörper auch mit einer spezifischen Markierung assoziiert. Da Antikörper im Überschuss hinzugefügt werden, binden nicht alle an Antigene, und wenn die Probe kein Antigen enthält, bindet dementsprechend kein Antikörper an das gewünschte Antigen. Um die "zusätzlichen" Antikörper zu entfernen, wird der Inhalt der Vertiefungen einfach gegossen. Infolgedessen werden alle "zusätzlichen" Antikörper entfernt, und diejenigen, die an die Antigene binden, bleiben erhalten, da die Antigene an die Oberfläche der Vertiefungen "geklebt" werden. Die Vertiefungen werden mehrmals mit einer speziellen Lösung gespült, mit der Sie alle "zusätzlichen" Antikörper waschen können.

    Enzymatische Reaktion - Bildung einer gefärbten Verbindung

    Als nächstes beginnt die zweite Stufe - eine enzymatische Reaktion. Eine Enzymlösung wird zu den gewaschenen Vertiefungen gegeben und 30-60 Minuten stehen gelassen. Dieses Enzym hat eine Affinität zu der Substanz (spezifische Markierung), an die die Antikörper gebunden sind. Das Enzym führt eine Reaktion durch, wodurch sich diese spezifische Markierung (Substrat) in eine gefärbte Substanz (Produkt) verwandelt. Dann wird die Konzentration dieser gefärbten Substanz durch Kolorimetrie bestimmt. Da diese spezifische Markierung mit Antikörpern assoziiert ist, ist die Konzentration des gefärbten Reaktionsprodukts gleich der Konzentration von Antikörpern. Und die Konzentration von Antikörpern ist gleich der Konzentration von Antigenen. Als Ergebnis der Analyse erhalten wir die Antwort, wie hoch die Konzentration der nachgewiesenen Mikrobe oder des nachgewiesenen Hormons ist.

    So findet ein direkter Enzymimmunoassay statt. Der indirekte enzymgebundene Immunosorbens-Assay wird heute jedoch häufiger verwendet, da die Empfindlichkeit und Genauigkeit des indirekten nicht höher ist als der direkte. Kommen wir also zu einem indirekten enzymgebundenen Immunosorbens-Assay.

    Indirekter Enzymimmunoassay - Stadien des

    Der indirekte Enzymimmunoassay besteht aus zwei Schritten. Während der ersten Stufe werden unmarkierte Antikörper gegen nachweisbare Antigene verwendet, und in der zweiten Stufe werden markierte Antikörper gegen die ersten unmarkierten Antikörper verwendet. Das heißt, es stellt sich keine direkte Bindung des Antikörpers an das Antigen heraus, sondern eine Doppelkontrolle: die Bindung von Antikörpern an das Antigen, wonach die Bindung der zweiten Antikörper an den Antikörper + Antigen-Komplex erfolgt. Antikörper für das erste Stadium sind in der Regel Mäuse und für das zweite Ziegen.

    Fixierung von Antigenen auf der Oberfläche der Vertiefung und Bindung von Antigen an unmarkierten Antikörper
    Neben dem direkten Enzymimmunoassay wird eine Probenahme von biologischem Material durchgeführt - Blut, Kratzer, Abstriche. Das untersuchte biologische Material wird in die Vertiefungen eingeführt und 15 bis 30 Minuten stehen gelassen, um Antigene an der Oberfläche der Vertiefungen zu haften. Dann werden unmarkierte Antikörper gegen Antigene in die Vertiefungen gegeben und für einen Zeitraum (1 bis 5 Stunden) belassen, so dass die Antikörper an „ihre“ Antigene binden und einen Immunkomplex bilden (erste Stufe). Entfernen Sie dann die "zusätzlichen", nicht gebundenen Antikörper, indem Sie den Inhalt der Löcher einfüllen. Mit einer speziellen Lösung spülen, um alle ungebundenen Antikörper vollständig zu entfernen.

    Die Bindung von markierten Antikörpern an das komplexe Antigen + unmarkierten Antikörper
    Dann nehmen sie die zweiten Antikörper - markiert, in die Vertiefungen gegeben und wieder einige Zeit stehen gelassen - 15 bis 30 Minuten (zweite Stufe). Während dieser Zeit binden markierte Antikörper an das erste - nicht markierte - und bilden einen Komplex - Antikörper + Antikörper + Antigen. In den Vertiefungen werden jedoch sowohl markierte als auch nicht markierte Antikörper im Überschuss zugesetzt. Daher ist es erneut erforderlich, die "zusätzlichen", bereits markierten Antikörper zu entfernen, die nicht an nicht markierte Antikörper gebunden haben. Wiederholen Sie dazu den Inhalt der Löcher und waschen Sie mit einer speziellen Lösung.

    Enzymatische Reaktion - Bildung einer gefärbten Verbindung
    Danach wird ein Enzym eingeführt, das die Reaktion der Umwandlung der "Markierung" in eine farbige Substanz ausführt. Die Färbung entwickelt sich innerhalb von 5-30 Minuten. Dann wird eine Kolorimetrie durchgeführt und die Konzentration der gefärbten Substanz berechnet. Da die Konzentration der gefärbten Substanz gleich der Konzentration an markierten Antikörpern ist und die Konzentration an markierten Antikörpern gleich der Konzentration an nicht markierten Antikörpern ist, die wiederum gleich der Konzentration an Antigen ist. Somit erhalten wir die Konzentration an nachweisbarem Antigen.
    Eine solche Doppelkontrolle in Form der Verwendung von zwei Arten von Antikörpern ermöglichte es, die Empfindlichkeit und Spezifität des Enzymimmunoassay-Verfahrens zu erhöhen. Trotz der Verlängerung der Analysezeit und der Einbeziehung zusätzlicher Schritte werden diese Verluste durch die Genauigkeit des Ergebnisses kompensiert. Aus diesem Grund ist derzeit die überwiegende Mehrheit der Enzymimmunoassay-Methoden ein indirekter Enzymimmunoassay.


    Welche Krankheiten werden durch Enzymimmunoassay erkannt??

    Wir werden weiter überlegen, welche Krankheiten und welche biologisch aktiven Substanzen durch einen enzymgebundenen Immunosorbens-Assay nachgewiesen werden. Substanzen, die durch einen Enzymimmunoassay nachgewiesen wurden, sind in der Tabelle dargestellt.

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