Was ist eine Blutuntersuchung für ELISA

Die Entwicklung der modernen Medizin in der Welt der Diagnostik überrascht immer wieder mit ihren Errungenschaften, und jetzt muss der Arzt keine Annahmen über die wahrscheinliche Diagnose treffen, sondern sich nur auf indirekte Anzeichen stützen. Durch die Erstellung und Einführung eines ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) in die Welt der Laborstudien können Sie nicht nur das Vorhandensein des Erregers, sondern auch viele andere Merkmale der Krankheit schnell und genau bestimmen.

Geschichte der Gründung und Entwicklung der IFA

Diese Methode der Blutuntersuchung wurde Mitte des letzten Jahrhunderts - irgendwo in den 60er Jahren - in der praktischen Medizin angewendet. Sein ursprüngliches Ziel war die wissenschaftliche Forschung auf dem Gebiet der Histologie, die sich auf die Suche und Untersuchung der zellulären Antigenstruktur biologischer Spezies beschränkte. Ein ELISA-Bluttest basiert auf der Wechselwirkung verwandter Antigene (AH) und spezifischer Antikörper (AT) mit der Bildung eines durch das Enzym definierten Antigen-Antikörper-Komplexes.

Ein solches Phänomen veranlasste die Wissenschaftler zu der Entscheidung, dass mit dieser Methode Proteinverbindungen verschiedener Klassen erkannt werden können, die im Blutserum gebildet werden, wenn ein Krankheitserreger in den Körper eindringt. Aufgrund ihrer direkten Beteiligung an der Funktion des Immunsystems werden diese Verbindungen als Immunglobuline (IG, Ig) bezeichnet, und die Entdeckung war der größte Durchbruch in der Labordiagnostik..

Gleichzeitig begannen sie erst in den 80er Jahren, diese hochsensible Methode aktiv anzuwenden, und sie war nur in hochspezialisierten medizinischen Einrichtungen erhältlich. Die ersten, die die Möglichkeit erhielten, Enzymimmunoassay-Analysegeräte zu verwenden, waren Stationen und Bluttransfusionszentren sowie venereologische und infektiöse medizinische Einrichtungen. Dies war auf die rasche Ausbreitung der "Pest des 20. Jahrhunderts" - AIDS - zurückzuführen, und es war dringend erforderlich, diagnostische und therapeutische Maßnahmen zu ergreifen..

Methodikmerkmale

Der Umfang der Blutuntersuchung für ELISA ist ziemlich groß - im Moment ist es unmöglich sich vorzustellen, wie kompliziert die Suche nach den Ursachen vieler Krankheiten sein würde. Eine solche Studie wird heute in fast allen medizinischen Bereichen angewendet, auch in der Onkologie. Obwohl es für Uninformierte schwierig ist, zu verstehen, dass es in einigen Fällen durchgeführt wurde, war es möglich, das Leben von Patienten zu retten, indem ein Tumor in den frühen Stadien entdeckt wurde.

In modernen Diagnosezentren werden Laboruntersuchungen nicht nur durch Tumormarker dargestellt, sondern verfügen auch über ein beeindruckendes Arsenal an Panels für diese Diagnose. Mit ihrer Hilfe können Sie viele pathologische Zustände wie hormonelle Anomalien und Infektionsprozesse verschiedener Herkunft identifizieren..

Darüber hinaus ermöglicht die Durchführung und Dekodierung eines ELISA-Bluttests die Verfolgung der Wirkung von Medikamenten auf den Körper einer kranken Person und sogar eines Tieres. Letzteres wird häufig in Tierkliniken eingesetzt, um die Gesundheit unserer Haustiere oder Ernährer zu erhalten und eine stabile Versorgung mit Fleisch, Milchprodukten und unersetzlichen Eiern in der Nahrung sicherzustellen.

Aufgrund der Entnahme von nur wenigen Millilitern venösem Blut und seiner Diagnose durch ELISA kann der Arzt, nachdem er die Forschungsmaterialien beschrieben hat, Folgendes bestimmen:

  • hormoneller Zustand, einschließlich biologisch aktiver Substanzen der Genital- und Schilddrüsen sowie der Nebennieren;
  • das Vorhandensein von bakteriellen und viralen Infektionen (Hepatitis B und C, Syphilis, Herpes, Chlamydien, Tuberkulose, Myko- und Ureaplasmose, HIV, TORCH) und anderen Krankheiten dieser Art;
  • Anzeichen einer lebenswichtigen Aktivität von Krankheitserregern des pathologischen Prozesses, die in einer Genesung gipfelten und in das Stadium der Antikörperbildung (Immunantwort) übergingen.

Solche Komplexe werden von Immunzellen viel leichter erkannt und eliminiert. Resteffekte in Form von Antikörpern bleiben in vielen Fällen lebenslang im Blut, was das Risiko einer erneuten Infektion praktisch auf Null reduziert.

Arten von Immunglobulinen

Es gibt verschiedene Arten von Antikörpern, von denen jeder in einem bestimmten Stadium am Prozess der Immunantwort beteiligt ist. Beispielsweise reagieren Immunglobuline der Klasse M (IgM) als erste auf das Eindringen von AH in den Körper. Ihre höchsten Raten werden in den frühen Tagen der Krankheit beobachtet.

Dann startet das Immunsystem Klasse G IG (IgG) in das Plasma, das für die vollständige Zerstörung der Antigene und die Wiederherstellung des Patienten verantwortlich ist. Später befinden sie sich weiterhin im Blut und bereiten so das Immunsystem auf die wiederholte Exposition gegenüber einem identischen Krankheitserreger vor. Nach diesem Prinzip funktioniert die Impfung. Mit der Einführung abgeschwächter Antigene pathologischer Mikroorganismen erscheinen viele Immunglobuline und zirkulieren im Plasma.

Wenn anschließend ein pathogener Kontakt auftritt, können sie die Infektion schnell bewältigen und den Körper vor einer Gesundheitsbedrohung bewahren. IgA in großen Mengen ist in den Schleimhäuten konzentriert und verhindert das Eindringen pathogener Viren und Bakterien in den Körper. IgEs sind für die Abtötung parasitärer Infektionen verantwortlich, und es gibt viele andere Immunglobuline, die an der Immunantwort beteiligt sind..

Die wichtigsten Objekte, die für die Labordiagnose von Interesse sind, sind die Ig-Klassen M, G und A. Anhand ihrer Konzentration können Sie das Stadium der Krankheit bestimmen und herausfinden, welche Infektionskrankheiten eine Person in ihrem Leben hatte. Sie können beispielsweise nach Windpocken oder Röteln in der Vorgeschichte suchen. Um herauszufinden, ob eine bestimmte Art von AT oder AH im Körper des Patienten vorhanden ist oder welche Hormonkonzentration vorliegt, muss der Arzt nicht mehrere Laboruntersuchungen verschreiben - es reicht aus, eine Überweisung für einen ELISA zu schreiben.

Das Wesentliche der Methodik

Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay für Parasiten und andere Mikroorganismen, die für die Gesundheit des Körpers schädlich sind, ermöglicht es, nicht nur das Vorhandensein von Krankheitserregern festzustellen, sondern auch deren Häufigkeit im Blutplasma des Patienten zu ermitteln. Somit ermöglicht eine solche Studie sowohl eine qualitative als auch eine quantitative Analyse pathogener Mikroorganismen, die in Serummaterial gefunden werden..

Das Konzentrationsniveau des Erregers beeinflusst die Entwicklung der Infektion und die Geschwindigkeit der Genesung erheblich. Daher wird eine qualitative Bewertung als nicht weniger wichtig als quantitativ angesehen. Sie spielt weit entfernt von der letzten Rolle bei der Behandlung von Kindern und Erwachsenen. Aber wie kommt es, dass ELISA eine so breite Palette von Mikroorganismen erkennen kann, die im Körper von Menschen und Tieren parasitieren, Schaden anrichten und die Lebensqualität beeinträchtigen??

Die Forschungsmethodik basiert auf mehreren Optionen (direkt und indirekt - wettbewerbsfähig und nicht wettbewerbsfähig) zur Erfüllung der Aufgaben, von denen jede für bestimmte Zwecke bestimmt ist. Dieser Ansatz ermöglicht eine gezielte Suche und in kürzester Zeit die Identifizierung der Ursache einer bestimmten Pathologie. Zum Nachweis von Ig verschiedener Klassenkategorien wird eine 96-Well-Platte (Polystyrol-Panel) verwendet, und sorbierte rekombinante Proteine ​​befinden sich in ihren Wells. Sie spielen die Rolle von Antigenen und befinden sich im Anfangsstadium in der festen Phase.

Beim Eintritt in das Loch mit Blutplasma identifizieren Antigene oder Antikörper das Objekt in Verbindung mit seiner Orientierung und bilden einen Komplex (AG - AT). Diese Bildung wird durch eine enzymatische Verbindung (Konjugat) fixiert, die sich anschließend in einer veränderten Färbung des Lochs äußert. Der ELISA wird an spezifischen Testsystemen durchgeführt, die in spezialisierten Labors hergestellt und mit einer vollständigen Palette von Reagenzien ausgestattet sind.

Diese Analyse kann an Laus - Waschmaschinen und Lesespektrophometern durchgeführt werden, erfordert jedoch Handarbeit. Natürlich ist der Laborassistent um ein Vielfaches bequemer und schneller, um alle Manipulationen an vollautomatisierten Geräten durchzuführen. Bei ihrer Verwendung ist das Laborpersonal von einer großen Menge monotoner Aktivitäten befreit - Waschen, Begraben und der Rest der Routine, aber nicht alle medizinischen Einrichtungen können sich solch teure Geräte leisten

Die Interpretation von Forschungsmaterialien liegt ausschließlich in der Kompetenz eines Labordiagnostikers - nur ihm können die Ergebnisse über die Besonderheiten und Feinheiten des Krankheitsverlaufs mitgeteilt werden. In diesem Fall muss der Arzt auf jeden Fall die Möglichkeit in Betracht ziehen, falsch negative oder falsch positive Antworten zu erhalten.

Materialentschlüsselung

Das Ergebnis eines qualitativen enzymgebundenen Immunosorbens-Assays sollte eine eindeutige Schlussfolgerung sein - der gewünschte Mikroorganismus wurde in dieser Blutprobe gefunden oder nicht. Die quantitative Analyse zeigt den Konzentrationsgrad an und kann auf zwei Arten ausgedrückt werden - den Wert in Zahlen oder die Anzahl der „+“ - Zeichen.

Analysierte Indikatoren

Im Verlauf der Forschung wurde eine gründliche Untersuchung der wichtigsten Immunglobuline durchgeführt, die an der Immunantwort beteiligt sind, wie z.

  • IgM - Nachweis dieser Klasse bedeutet die Entwicklung einer akuten Form einer Infektionskrankheit. Ein negatives IgM-Suchergebnis kann sowohl ein Hinweis auf das Fehlen des gewünschten Pathogens als auch auf den Übergang der Krankheit zu einem chronischen Verlauf sein.
  • IgA - die Definition dieser Klasse in Abwesenheit von IgM in den meisten Fällen ein Signal für eine chronische oder latente Form der Entwicklung einer Infektionskrankheit.
  • IgM und IgA (gleichzeitige Anwesenheit) - positive Ergebnisse für beide Spezies zeigen den Peak der akuten Form der Pathologie.
  • IgG - sein Vorhandensein zeigt die Umwandlung der Krankheit in eine chronische Form oder Genesung und die Bildung einer Immunität gegen den zu bestimmenden Wirkstoff an.

Die Entstehung und Akkumulation einer bestimmten Klasse von IG erfolgt zu verschiedenen Zeitpunkten. So erscheint beispielsweise IgM zuerst, ungefähr 5 Tage nach dem Eintritt des Pathogens. IG sind etwa 5-6 Wochen im Blut und verschwinden dann allmählich. Zu diesem Zeitpunkt stehen sie zur Bestimmung durch ELISA zur Verfügung. Ungefähr 3-4 Wochen nach Ausbruch der Krankheit tritt IgG auf, das anschließend mehrere Monate verbleiben kann. In der Analyse können sie jedoch nicht immer erkennen.

IgA wird im Blut während des Zeitraums von 2 bis 4 Wochen gebildet, während 20% davon im Serum und 80% im Geheimnis der Schleimhäute enthalten sind. In der Regel verschwinden diese Immunglobuline innerhalb von 2 bis 9 Wochen, was auf die Zerstörung des Erregers und die Genesung des Patienten hinweist. Wenn der ELISA immer noch das Vorhandensein von IgA zeigt, signalisiert dies den Übergang des Prozesses zu einer chronischen Form.

Optionen für Analyseergebnisse

Abhängig von den erhaltenen Daten können ELISA-Antworten auf einem Formular in Form einer Tabelle mit einer vollständigen Liste aller Antikörper und Bluthochdruck sowie einem Hinweis auf eine positive oder negative Reaktion ausgegeben werden. In bestimmten Situationen wird ein quantitativer Wert angezeigt - ein scharf positives, positives, schwach positives oder negatives Ergebnis. Die zweite Option gibt die Menge an Antikörpern in der untersuchten Blutprobe an..

Zusätzlich zu den obigen Werten wird im Rahmen des ELISA ein weiterer quantitativer Parameter untersucht - der Aviditätsindex von AT, berechnet in Prozent. Es zeigt, wie lange die Krankheit anhält - das heißt, je höher der Indikator, desto länger entwickelt sich die Pathologie..

Eine alternative Methode des ELISA

Ein Enzymimmunoassay ist eine ziemlich bekannte und häufige Diagnose. Vielleicht haben einige noch nie von ihr gehört, aber es gibt eine Variante dieser Studie, die einem breiten Personenkreis noch weniger bekannt ist, bei der eine Nicht-Blutprobe entnommen wird. Diese Technik wird als Stuhlanalyse für okkultes Blut bezeichnet und vermeidet in vielen Fällen zusätzliche schwächende Verfahren, die auch mit unangenehmen Empfindungen einhergehen..

Ein ELISA für okkultes Blut (Hämoglobinmoleküle) ermöglicht es, auch leichte Blutungen des Verdauungssystems zu erkennen, deren Anzeichen mit bloßem Auge nicht im Stuhl des Patienten zu finden sind. Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay von okkultem Blut in menschlichem Kot in kurzer Zeit kann Magengeschwüre, Polyposis, Divertikulose und Tumore zeigen, die im Frühstadium nicht mit bestimmten Symptomen einhergehen.

Bis heute wurden Tausende von Testsystemen für Enzymimmunoassays entwickelt, mit denen Antikörper und Bluthochdruck in einer großen Liste von Pathologien gefunden werden können. Daher wird diese Analyse in fast allen Bereichen der Medizin für jede Alterskategorie verwendet. Und absolute Harmlosigkeit ermöglicht es Ihnen, während der Schwangerschaft und zur Diagnose geschwächter Patienten darauf zurückzugreifen.

ELISA für Syphilis

Was ist ELISA für Syphilis?

ELISA für Syphilis - ein erschwinglicher und sehr informativer Test

ELISA ist ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay, der als hochempfindlicher Test bei der Diagnose verschiedener Pathologien, einschließlich Syphilis, verwendet wird. Ermöglicht es Ihnen, die Krankheit zu identifizieren und ihr Stadium so genau wie möglich zu bestimmen.

Syphilis entsteht, wenn das Bakterium Treponema pallidum (Treponema pallidum) in den Körper eindringt. Nach 2 bis 4 Wochen bildet sich an der Stelle, an der die Einführung erfolgte, ein fester Schanker auf der Haut, meistens bildet sich die für die Syphilis charakteristische Papel an den Genitalien, was das Anfangsstadium der primären Syphilis bedeutet. Während sich die Krankheit entwickelt, verwandeln sich die Papeln in Geschwüre und verschwinden dann in den meisten Fällen, was dem Patienten eine falsche Hoffnung auf Selbstheilung gibt. Die Latenzzeit geht jedoch in das Stadium der sekundären Syphilis über, während sich Treponeme bereits im ganzen Körper ausbreiten und in Gewebe und Organe eindringen. Auf Haut und Schleimhäuten bilden sich mehrere Hautausschläge. Unbehandelt beginnt das nächste Stadium - die tertiäre Syphilis mit der Bildung von Zahnfleisch und einer Schädigung des Zentralnervensystems, des Herzens, des Knochengewebes, des Magen-Darm-Trakts, der Mundhöhle und anderer Organe.

Der Nachweis von Antikörpern bestätigt die Infektion

Der ELISA bestimmt die primäre, sekundäre, tertiäre (meist erst im Anfangsstadium), angeborene, wiederkehrende und latente Syphilis. Die Essenz der Methode besteht darin, Antikörper nachzuweisen, die der Körper als Reaktion auf die Einführung eines Treponems produziert. Im Anfangsstadium der Krankheit werden Klasse-M-Antikörper gebildet, an die sich nach einigen Wochen Immunglobuline der Klasse G anlagern. Die Konzentration bestimmter Antikörper variiert je nach Entwicklungsstadium der Syphilis, wodurch Sie das Stadium der Krankheit bestimmen können. Bei der Durchführung eines ELISA ist das echte Treponem blass oder seine Antigene, daher bezieht sich der Test auf treponemale Analysen.

Vor- und Nachteile der Methode

Jede Forschungsmethode ist nicht ohne Mängel.

Zuvor wurden verschiedene Methoden zur Diagnose von Syphilis verwendet, wie zum Beispiel: RPHA (passive Hämagglutinationsreaktion), RW (Wasserman-Reaktion), MR (Fällungsmikroreaktion), RSK (Komplementbindungsreaktion) und andere Tests. Die Vielzahl von Analysen als Screening-Tests und das Fehlen eines einheitlichen Systems führten häufig zu Verwirrung und zu negativen Konsequenzen, beispielsweise wenn ein Spender mit einem falsch negativen Ergebnis ein Vermittler bei der Infektion von Empfängern wurde. Seit 2006 sind die Tests standardisierter geworden. Der ELISA wurde als eine der effektivsten Diagnosemethoden anerkannt und wird derzeit als Verifikationstest verwendet, wenn ein positives Ergebnis einer nicht-treponemalen Analyse festgestellt wird..

Nicht-reponemale Tests sind Screening-Tests.

Jetzt werden nicht-treponemale Analysen verwendet, um eine mögliche Syphilis-Infektion in allen Bevölkerungsgruppen zu identifizieren, dh sie sind Screening-Tests. Bei einem zweifelhaften oder positiven Ergebnis wird eine IFA oder eine andere treponemale Analyse vorgeschrieben. ELISA ist aufgrund seiner Vorteile zu einem der führenden Tests für Syphilis geworden:

  • hohe Empfindlichkeit zum Nachweis von Antikörpern gegen Treponem in sehr geringer Konzentration;
  • Eine hohe Spezifität wird durch die Verwendung von blassen Treponema-Antigenen erreicht.
  • Objektivität der Ergebnisse aufgrund automatischer Abrechnung;
  • Die einfache Einstellung der Reaktion erfolgt dank eines vollständigen Satzes von Sätzen zur Diagnose.
  • Universalität des Tests: Kann zur vorbeugenden Untersuchung der Bevölkerung, zur Diagnose aller Stadien der Krankheit und zur Überprüfung zweifelhafter Ergebnisse verwendet werden.

Antikörper gegen Treponema pallidum ähneln einigen Arten von Immunglobulinen, die während anderer Arten von Infektionen gebildet werden. Daher können trotz der Spezifität des ELISA falsch positive Ergebnisse in geringen Mengen nachgewiesen werden. Ein weiterer Nachteil des ELISA besteht darin, dass mit fortschreitender Krankheit die Anzahl der Antikörper abnimmt, was zu einem falsch negativen Ergebnis führen kann..

Indikationen für die Studie.

Schwangerschaft - Indikation zur Analyse

ELISA wird als Bestätigungstest nach nicht-reponemaler Analyse durchgeführt, kann aber auch als Screening-Analyse dienen. In folgenden Fällen ernannt:

  • geplante Tests bei der Beantragung bestimmter Arten von Arbeiten;
  • routinemäßige Identifizierung des Infektionsrisikos;
  • Krankenhausaufenthalt, präoperative Zeit;
  • Spende;
  • Schwangerschaft;
  • Screening auf Syphilis-Symptome.

Syphilis kann durch ein bestimmtes Zeichen vermutet werden - die Bildung eines harten Schankers sowie Schmerzen in den Gelenken und Knochen, Schwellungen der Geschlechtsorgane, eine Erhöhung der Körpertemperatur auf 38 ° C und eine Erhöhung der Lymphknoten. Zur Prophylaxe wird empfohlen, regelmäßig eine Studie mit einem aktiven Sexualleben mit Partnerwechsel durchzuführen.

Studienvorbereitung

In einer fieberhaften Zeit sollten Sie den Test unterlassen.

Um das Risiko eines falschen Ergebnisses zu minimieren, sollten Sie die Regeln befolgen.

  1. Eine Blutprobe wird auf leeren Magen verabreicht. Je nach Labor sollte die Hungerperiode 4 bis 12 Stunden betragen.
  2. Der Vortag schließt Alkohol und fetthaltige Lebensmittel aus, das Rauchen ist mindestens eine Stunde vor der Studie begrenzt.
  3. Am Vorabend der Analyse können Sie nur sauberes Wasser trinken, es dürfen keine Säfte, Kaffee oder Drogen verwendet werden.
  4. Alle anderen Studien und medizinischen Verfahren werden nach Bestehen des Tests durchgeführt..
  5. Sie sollten nicht getestet werden, wenn in den letzten Tagen Fieber aufgetreten ist oder eine Impfung durchgeführt wurde..
  6. Frauen wird nicht empfohlen, während der Menstruation einen Test zu machen..

Ergebnisse entschlüsseln

Ein positives Ergebnis zeigt das Vorhandensein eines Virus an

  • das Vorhandensein einer blassen Treponema-Infektion;
  • falsch positives Ergebnis bei Vorhandensein anderer Faktoren;
  • Auswirkungen der zuvor behandelten Syphilis.
  • Mangel an Infektion;
  • Inkubationszeit (frühe primäre Phase) der Syphilis;
  • späte Periode, einschließlich später Stadien der Entwicklung der tertiären Syphilis.

Falsch positives Ergebnis und seine Ursachen

Falsch positiver Test kann für Diabetes sein

Treponema pallidum ist eine Spirochät mit 42 Genfamilien, von denen 17% Proteinen anderer Bakterienarten ähnlich sind, was in wenigen Fällen zu einem positiven Ergebnis bei Vorhandensein einer Infektion durch andere Mikroorganismen führt. Beispielsweise werden bei einer Reihe von Autoimmunerkrankungen Antiphospholipid-Antikörper nachgewiesen, die denen für Syphilis ähnlich sind. Um die Wende des 21. Jahrhunderts wurde festgestellt, dass in diesem Fall der Unterschied zwischen Antikörpern ein Abhängigkeitsfaktor ist, bei Autoimmunerkrankungen sind Antikörper von p2-Glykoprotein-1 abhängig und bei Syphilis nicht abhängig. Bis heute bleibt jedoch die Frage nach dem Auftreten falsch positiver Reaktionen offen, da der Grund für solche Ergebnisse nicht immer klar ist.

Laut Statistik zeigen sich am häufigsten falsch positive Ergebnisse in folgenden Fällen:

  • Hepatitis;
  • Lepra;
  • Herzinfarkt;
  • Rausch;
  • Bindegewebserkrankungen;
  • Autoimmunpathologien;
  • Diabetes mellitus;
  • Schwangerschaft;
  • Menstruationsperiode;
  • Zeit nach der Impfung.

Treponema hat Ähnlichkeiten mit anderen Krankheitserregern

Treponema pallidum ist nicht die einzige Trepan-Art, andere Spirochäten gehören zu den pathogenen Krankheitserregern: Treponema pertenue (Erreger von Java), Treponema bejel (Erreger des Bejel), Treponema carateum (Erreger des Pint) und viele andere. Bei mikroskopischer Untersuchung unterscheiden sie sich kaum von blassem Treponem, und Antikörper gegen sie ähneln Immunglobulinen bei Syphilis.

Ein positives Ergebnis kann das Vorhandensein der Krankheit in der Vergangenheit widerspiegeln, da Immunglobuline der Klasse G jahrelang im Blutkreislauf verbleiben können.

Falsch negatives Ergebnis und seine Ursachen.

In der Inkubationszeit kann das Ergebnis negativ sein

Im Anfangsstadium der Krankheit zeigt der ELISA ein negatives Ergebnis, dieser Zeitraum ist eine Inkubation, wenn noch keine primäre Syphilis aufgetreten ist und keine charakteristischen Anzeichen der Krankheit vorliegen. Die Inkubationszeit im Vergleich zu Daten zur Syphilis-Infektion Mitte des 20. Jahrhunderts erhöhte sich um 7 bis 10 Tage, derzeit beträgt sie etwa 3 Wochen. Dies bedeutet, dass nach dem Eindringen von Treponema in den Körper für 3 und manchmal mehr Wochen ein falsch negatives Ergebnis festgestellt wird.

Ohne Therapie entwickelt sich die tertiäre Syphilis normalerweise nach 3 bis 5 Jahren ab dem Zeitpunkt der Infektion. In einigen Fällen kann die Krankheit nach 10 bis 15 Jahren vor dem Hintergrund eines asymptomatischen Verlaufs und des Übergangs der Syphilis von einem Stadium zum anderen auftreten. Zu diesem Zeitpunkt ist die Anzahl der Antikörper signifikant verringert oder sie fehlen vollständig, was zu einem falsch negativen Ergebnis führt. Berichten zufolge können verschiedene Infektionskrankheiten, Diabetes mellitus und die Verwendung bestimmter Antibiotika das falsche falsche Ergebnis beeinflussen..

ELISA-Bluttest

Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA) wird durchgeführt, um die Schutzfunktionen des Körpers umfassend zu bewerten. Während der Studie werden Anzahl und Eigenschaften der Immunzellen sowie das Vorhandensein der notwendigen Antikörper bestimmt. Ein ELISA-Bluttest wird durchgeführt, um infektiöse, hämatologische, Autoimmunerkrankungen sowie primäre und sekundäre Immundefekte zu diagnostizieren. Überlegen Sie, was eine Blutuntersuchung mittels ELISA ist und welche Indikationen für diese Studie vorliegen.

Was ist das

Ein ELISA ist eine Labormethode, mit der Antikörper oder Antigene in einer Blutprobe bestimmt werden. Diese Studie wird verwendet, um den Gehalt an Immunglobulinen, immunologischen Komplexen und Hormonen nachzuweisen..

Indikationen zur Analyse

Für die Ernennung eines ELISA-Bluttests liegen folgende Indikationen vor:

  • Diagnose sexuell übertragbarer Infektionen - Ureaplasma, Mycoplasma, Chlamydien, Trichomonas, Syphilis;
  • Diagnose von Viruserkrankungen - Cytomegalievirus, Herpes, Hepatitis, Epstein-Barr-Virus;
  • Bestimmung des Hormonspiegels;
  • Diagnose von Krebs;
  • Bestimmung des Immundefekts;
  • Diagnose von Allergien;
  • präoperative umfassende Untersuchung vor Organtransplantation;
  • Einschätzung der Wirksamkeit der Therapie.

Methodenprinzip

Das Prinzip der Enzymimmunoassay-Methode basiert auf der Bestimmung spezifischer Antikörperproteine ​​in den Blut-Immunglobulinen. Immunglobuline werden vom menschlichen Immunsystem produziert, wenn Antigene (fremde Mikroorganismen) in den Körper gelangen. Solche Immunmoleküle binden an viele infektiöse Krankheitserreger im Körper und neutralisieren sie..

Immunglobuline haben eine wichtige charakteristische Spezifität. Aufgrund dessen können sie an ein bestimmtes Antigen binden und einen Antigen-Antikörper-Komplex bilden. Während des ELISA einer Blutuntersuchung wird dieser Komplex qualitativ und quantitativ bestimmt.

Es gibt fünf Klassen von Immunglobulinen. In der Regel werden jedoch drei Klassen definiert - Immunglobuline A, M, G. Diese Antikörper reichern sich zu unterschiedlichen Zeitpunkten ab dem Zeitpunkt der Infektion im Körper an..

  • Immunglobuline der Klasse M (IgM) treten am fünften Tag nach dem Zeitpunkt der Infektion zum ersten Mal im Blut auf. Sie sind 5-6 Wochen im Körper und verschwinden dann aus dem Blutkreislauf. IgM-Antikörper zeigen eine akute Periode der Krankheit oder eine Verschlimmerung der Krankheit in ihrem chronischen Verlauf an.
  • Ungefähr 3-4 Wochen nach der Infektion erscheinen Immunglobuline der Klasse G (IgG) im Blut. Sie können mehrere Monate oder sogar Jahre im Blut einer Person existieren. Nach der Interpretation des ELISA eines Bluttests sprechen zwei nach zwei Wochen nacheinander entnommene Blutproben, die die Anzahl der IgG-Immunglobuline erhöht haben, von einer aktuellen Infektion oder Reinfektion - einer erneuten Infektion mit derselben Infektion.
  • Immunglobuline der Klasse A (IgA) können mit dieser Testmethode 2–4 Wochen nach Infektion oder Verschlimmerung einer Infektionskrankheit nachgewiesen werden. Von diesen zirkulieren nur 20% im Blut, der Rest befindet sich im Geheimnis der Schleimhäute. IgA-Antikörper verschwinden 2–8 Wochen nach der Zerstörung der Infektionserreger aus dem Blutkreislauf. Das Verschwinden dieser Immunglobuline bedeutet eine Heilung der Infektion. Wenn das Vorhandensein von IgA-Antikörpern im Blut nach dem Ende der Krankheit festgestellt wird, ist die Krankheit in das chronische Stadium übergegangen.

Analysevorbereitung

Für die Analyse von Blut mittels ELISA wird am häufigsten menschliches Blut verwendet. Sie können aber auch den Inhalt des Glaskörpers, der Cerebrospinalflüssigkeit und des Fruchtwassers untersuchen.

Dem Patienten wird eine Blutprobe zur Untersuchung aus der Kubitalvene entnommen. Es wird empfohlen, Blut auf leeren Magen zu spenden (ab dem Moment der letzten Mahlzeit sollten mindestens 12 Stunden vergehen). Es ist notwendig, den Arzt zu informieren, wenn der Patient Medikamente einnimmt, da einige von ihnen das Ergebnis der Analyse ändern können. Die Zuverlässigkeit der Ergebnisse der Studie wird durch den Konsum von Alkohol und Drogen beeinträchtigt..

Entschlüsselung

Die Ergebnisform dieser Analyse zeigt das positive (+) oder negative (-) Ergebnis der Bestimmung jeder Klasse von Immunglobulinen an.

Betrachten Sie die Interpretation einer möglichen Dekodierung eines ELISA-Bluttests.

  • Negatives Ergebnis von IgM, IgG, IgA - mangelnde Immunität gegen Infektionen.
  • Negativ IgM, IgA und IgG positiv - Immunität nach Infektion oder Impfung.
  • Negative oder positive IgG-, IgA- und IgM-positive - akute Infektion.
  • Ein positives Ergebnis von IgM, IgG, IgA - Verschlimmerung einer chronischen Infektionskrankheit.
  • Negatives IgM-Ergebnis und negatives oder positives IgG, IgA-Ergebnis - chronische Infektion.
  • Negatives IgM-Ergebnis und nicht bestimmtes IgG, IgA - Erholung.

Methodenvorteile

Ein ELISA-Bluttest hat viele Vorteile. Die wichtigsten können unterschieden werden:

  • relativ hohe Genauigkeit (Empfindlichkeit);
  • die Möglichkeit einer frühzeitigen Diagnose;
  • die Fähigkeit, die Dynamik des Infektionsprozesses zu verfolgen;
  • hoher Vereinigungsgrad, der ein Massenscreening ermöglicht;
  • eine kurze Zeitspanne, die erforderlich ist, um ein Analyseergebnis zu erhalten;
  • Bequemlichkeit bei der Arbeit;
  • Automatisierung aller Analysephasen;
  • relativ niedrige Kosten.

Nachteile

Der Nachteil der ELISA-Methode besteht darin, dass sie manchmal falsch negative oder falsch positive Ergebnisse liefert. Neben technischen Fehlern während der Studie kann der Rheumafaktor des Patienten, das Vorhandensein chronischer Krankheiten (bei denen Antikörper produziert werden), Stoffwechselstörungen und die Verwendung bestimmter Medikamente die Ursache für falsche Ergebnisse sein.

ELISA-Bluttest auf Parasiten

Mit dieser Methode bestimmen Blutuntersuchungen das Vorhandensein der folgenden parasitären Prozesse im Körper:

  • Ascariasis;
  • Trichinose - die Analyse wird mehrmals durchgeführt, der maximale Antikörperspiegel wird 4-12 Wochen nach der Infektion bestimmt;
  • Zystizerkose;
  • Teniose;
  • Faszioliasis - Antikörper werden im akuten Stadium der Krankheit bestimmt;
  • Opisthorchiasis - Differenzialdiagnose zwischen der chronischen und der akuten Form der Krankheit durchführen;
  • Giardiasis;
  • viszerale und kutane Leishmaniose;
  • Amöbiasis;
  • Toxoplasmose.

Ein ELISA-Bluttest auf Parasiten wird verwendet, um Antigene (Parasiten und ihre Stoffwechselprodukte) und Antikörper (Immunglobuline) nachzuweisen. Immunglobuline werden im Körper als Antikörper gegen Antigene produziert. Die Spezifität dieser Methode bei der Bestimmung von Parasiten beträgt 90%. Mit dieser Analyse können Sie die Art der Parasiten, ihre Anzahl und aufgrund der Menge an Antikörpern bestimmen, um die Dynamik der Prozesse zu verfolgen.

Beschreibung der Diagnose von sexuell übertragbaren Krankheiten: Enzymimmunoassay (ELISA)

Die Liste der verfügbaren Diagnosetechniken in den letzten Jahrzehnten wächst rasant. Diagnostiker versuchen mit neuen Methoden, die Vorteile aller vorherigen Tests zu kombinieren und alle ihre bisherigen Mängel zu beseitigen.

In letzter Zeit erscheint in der Liste der diagnostischen Verfahren häufiger ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay - ein moderner und ziemlich neuer Test, der einem normalen Menschen, der nicht mit der Medizin in Verbindung steht, wenig bekannt ist. Trotzdem erweitert diese Technik rasch die Zahl der Anhänger unter qualifiziertem medizinischem Personal. Was es ist und in welchen Fällen es verwendet werden sollte, können Sie versuchen, es herauszufinden, indem Sie sich seine Merkmale und Hauptmerkmale ansehen.

Die Essenz der Methode

Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay ist eine Instrumentallabortechnik, die auf der molekularen Antigen-Antikörper-Reaktion basiert und den Nachweis spezifischer Proteine ​​in biologischen Materialien (Proben für Forschungszwecke) ermöglicht. Solche Proteine ​​können Enzyme, eine Vielzahl von Mikroorganismen (Viren, Bakterien, Pilze), Protozoen usw. sein..

Nach der Entdeckung der Methode erhielt er den Namen ELISA-Test, der nicht mit dem Namen der Entdecker zusammenhängt, sondern eine Abkürzung des vollständigen Namens in der englischen Version ist - enzymgebundener Immunosorbens-Assay. Ärzte auf der ganzen Welt verwenden diesen Namen, einige Ärzte im russischsprachigen Raum nennen diese Art der Forschung auch.

Das Grundprinzip der Methode ist die molekulare Antigen-Antikörper-Reaktion.

Ein Antigen ist ein Fremdmolekül, das als Teil einer pathogenen Mikrobe in den menschlichen Körper gelangt. Antigene sind normalerweise Proteinmoleküle. Zusätzlich zu Mikroorganismen können solche „Fremden“ Zellen von Fremdblut sein, die in der Gruppe oder im Rh-Faktor nicht zusammenfallen.

In Reaktion auf die Aufnahme eines solchen Antigens wird im Körper eine Immunreaktion ausgelöst, die auf den Schutz vor Fremdmolekülen abzielt. Dies geschieht aufgrund der Synthese spezieller Wirkstoffe des Immunsystems - Antikörper (Immunglobuline). Jeder Antikörper ist nur für ein bestimmtes Antigen geeignet und neutralisiert das pathogene "Alien" durch Kontakt in einem einzigen Komplex. Es ist der Prozess einer solchen Bindung, der als Antigen-Antikörper-Reaktion bezeichnet wird.

Arten von Antikörpern

Alle Antikörper (Immunglobuline) werden in 5 Typen unterteilt, je nachdem, in welchem ​​Stadium der Immunantwort sie auftreten:

  • Klasse M (IgM). Ein Anstieg solcher Immunglobuline wird innerhalb der ersten Tage nach Einführung einer Infektion oder eines anderen Krankheitserregers beobachtet. Nach ungefähr 6 Wochen beginnen sie sich aufzulösen und zu verschwinden..
  • Klasse G (IgG). Im zweiten Stadium synthetisiert, um die Krankheit zu überwinden. Nach der vollständigen Eliminierung von Fremdmolekülen sind diese weiterhin in geringer Menge im Blut vorhanden, um im Falle einer erneuten Infektion Immunität zu gewährleisten.
  • Klasse A (IgA). Solche Immunglobuline sind für die Schutzfunktionen der Schleimhäute des Körpers verantwortlich, durch die pathogene Elemente am leichtesten eindringen, da das Schleimhautepithel viel dünner und empfindlicher ist als gewöhnliche Hautintegumente..
  • Klasse E (IgE). Diese spezifischen Globuline lenken ihre Wirkung gegen parasitäre Infektionen, die den menschlichen Körper betreffen. Sie treten unabhängig davon auf, welches Organsystem von Parasiten betroffen ist..
  • Klasse D (IgD). Diese Klasse findet man auch bei gesunden Menschen immer. Bei Kindern unter 10 Jahren nimmt sie allmählich zu, wonach sich ihre Menge, vorbehaltlich der absoluten Gesundheit, nicht ändert. Wenn der Indikator über den Normalwert ansteigt, kann dies auf eine Schwangerschaft, Asthma, Immunschwäche usw. hinweisen..

Für die ELISA-Diagnostik sind die IgG-, IgM- und IgA-Spiegel von Immunglobulinen am wichtigsten. Entsprechend ihren Credits können Sie herausfinden, ob eine Person zuvor eine Krankheit hatte oder sich kürzlich zusammengezogen hat, eine Immunität entwickelt hat oder ob ihr Körper gegen Pathologie schutzlos ist.

Vor- und Nachteile des Enzymimmunoassays

Derzeit ist der ELISA eine der genauesten und empfindlichsten Methoden. Es wurde von Spezialisten auf verschiedenen Gebieten der Medizin übernommen und erweitert seinen Anwendungsbereich weiter..

Methodenvorteile

  • Hohe Datengenauigkeit.
  • Empfindlichkeit (ermöglicht es Ihnen, die erforderliche Substanz auch bei minimalem Vorhandensein des Erregers in der Probe nachzuweisen).
  • Die Möglichkeit der Diagnose in den frühen Tagen der Krankheit oder in der Inkubationszeit.
  • Die Geschwindigkeit der Datenerfassung im Vergleich zu anderen Methoden mit ähnlicher Genauigkeit.
  • Hohe Automatisierung des Prozesses und minimale menschliche Beteiligung, was die Genauigkeit des Darstellers verringert.
  • Erhalten von Daten über das Stadium des pathologischen Prozesses und die Wirksamkeit der ausgewählten Therapie.
  • Schmerzfreie und geringe Invasivität bei der Materialauswahl.

Nachteile der Methode

  • In den meisten Fällen können Sie damit die Reaktion des Körpers auf einen Krankheitserreger und nicht auf den Krankheitserreger selbst bestimmen.
  • Vor der Studie muss die angebliche Krankheit genau bekannt sein, da der Test hochspezifisch ist..
  • Die Wahrscheinlichkeit falscher Indikatoren, die durch technische Probleme, die Einnahme von Medikamenten, das gleichzeitige Vorhandensein mehrerer chronischer Krankheiten oder Stoffwechselstörungen im Körper des Patienten verursacht werden.
  • Die Interpretation der Ergebnisse sollte nur von einem hochqualifizierten Spezialisten durchgeführt werden, da für die Interpretation der erhaltenen Daten eine spezielle Ausbildung und ein großer Bestand an medizinischem Wissen in einem bestimmten Bereich erforderlich sind.
  • ELISA ist eine eher seltene Analyse, daher wird sie nicht in allen diagnostischen Labors durchgeführt.
  • Das Verfahren ist ziemlich teuer, da das Labor neben Reagenzien über zahlreiche teure Geräte und Proben von Antigenen verfügen muss, die in speziellen Instituten hergestellt werden.

In welchen Fällen verwenden Sie einen Enzymimmunoassay

Die vollständige Liste der Indikationen für die Ernennung eines Enzymimmunoassays ist sehr umfangreich und umfasst nahezu alle Bereiche der Medizin.

Am häufigsten wird IFA für folgende Zwecke verwendet:

  • Erkennung von Infektionskrankheiten;
  • Diagnose sexuell übertragbarer Krankheiten;
  • Bestimmung des Immunstatus oder einzelner Autoimmunerkrankungen;
  • Identifizierung von Tumormarkern;
  • Hormonbestimmung.

Bei Infektions- und Viruserkrankungen können mit der Technik folgende Pathologien identifiziert werden:

  • alle Arten von Virushepatitis;
  • Epstein Barr Virus;
  • alle TORCH-Infektionen;
  • alle Arten von Darminfektionen;
  • HIV
  • Syphilis;
  • die meisten parasitären Infektionen;
  • Helicobacteriose usw..

Darüber hinaus können Sie mit ELISA schnell und effektiv einen Herzinfarkt bestimmen, das Fortpflanzungspotential des Körpers bewerten, Allergien, seine Ursache usw. identifizieren..

Ein enzymgebundener Immunosorbens-Assay wird verwendet, um klinische Studien während der Entwicklung neuer Arzneimittel durchzuführen und deren Wirkung auf den menschlichen Körper zu bewerten..

Arten von Proben und Methoden für ihre Auswahl für die Forschung

Am häufigsten ist das untersuchte Material für den enzymgebundenen Immunosorbens-Assay Blut, das aus der Ulnarvene des Patienten entnommen wird. Die Probenahme erfolgt vor allem morgens auf nüchternen Magen. Nach der Selektion aus dem Blut werden die geformten Zellen, die die Studie stören, getrennt und entfernt, wobei nur Serum übrig bleibt.

Bei der Diagnose von Urogenitalinfektionen handelt es sich häufig um Abstriche aus den Schleimhäuten der Genitalien, Schleim aus der Harnröhre oder dem Gebärmutterhals, Proben aus dem Rektum, Kratzer durch Erosion oder Geschwüre in der Leiste und anderen Körperteilen. Abstriche können sowohl aus der Mundhöhle als auch aus dem Nasopharynx entnommen werden.

Manchmal wird in der geburtshilflichen und gynäkologischen Praxis während der Schwangerschaft ein Enzymimmunoassay verwendet, um den Zustand des Fruchtwassers zu bestimmen. In diesem Fall wird das Fruchtwasser zu einer Probe. Dazu wird eine kleine Menge Flüssigkeit entnommen, die mit einer langen Nadel in die fetale Blase eindringt. Alle Manipulationen werden mit einem sterilen Instrument durchgeführt, um mögliche Risiken zu minimieren..

Oft wird das Material zu Liquor cerebrospinalis oder seröser Flüssigkeit. Dies geschieht bei örtlicher Betäubung, die injiziert wird..

Klären Sie, welche Art von Materialien für den enzymgebundenen Immunosorbens-Assay erforderlich sind, falls ein Spezialist die Studie leitet. Oft werden mehrere Arten von Proben gleichzeitig oder an verschiedenen Orten entnommen. Ein Arzt, der eine Überweisung für diese Art der Untersuchung ausstellt, sollte den Patienten auch über die Vorbereitung der Lieferung von Biomaterial informieren.

Vorbereitung für den Enzymimmunoassay

Um die Genauigkeit der nach einem Enzymimmunoassay erhaltenen Daten zu erhöhen, sollte die Vorbereitung für die Materialauswahl wie folgt sein:

  • 10 Tage vor der Studie Antibiotika, antivirale und antimykotische Medikamente ausschließen;
  • pro Tag ist es notwendig, Alkohol, Rauchen und die Einnahme von Betäubungsmitteln auszuschließen;
  • im gleichen Zeitraum ist es notwendig, körperliche Überlastung zu vermeiden;
  • den verschreibenden Spezialisten vor allen Arzneimitteln zu warnen, die der Patient einnimmt;
  • Benachrichtigen Sie einen Arzt bei Schwangerschaft oder Verdacht auf Schwangerschaft.

Am besten, wenn die Testmaterialien morgens auf nüchternen Magen ausgewählt werden..

Wenn die Diagnose darauf abzielt, den Zustand des hormonellen Hintergrunds zu bestimmen, ist es wichtig, am Vorabend einen ruhigen Zustand sicherzustellen und nervöse Spannungen zu vermeiden. Bei Frauen wird die Blutspende für Hormone eindeutig durch den Zeitraum des monatlichen Zyklus bestimmt, wie der Arzt zum Zeitpunkt des Termins sagen wird.

2-3 Tage vor der Auswahl des Materials müssen gebratene und fettige Produkte von der Speisekarte ausgeschlossen werden. Vor der Hepatitis-Analyse sollten keine Zitrusfrüchte und kein anderes Obst und Gemüse in Orange und Gelb gegessen werden.

Dekodierung der Ergebnisse des Enzymimmunoassays

Das Ergebnis einer qualitativen Studie wird normalerweise durch die Zeichen „+“ (gefunden) oder „-“ (nicht gefunden) angezeigt..

Das Vorhandensein oder Fehlen bestimmter Gruppen von Immunglobulinen kann die folgenden Schlussfolgerungen ziehen:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) - das Immunsystem gegen die Krankheit fehlt vollständig (der Körper ist dieser Art von Antigen bisher nicht begegnet);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) - zuvor gab es eine Kollision mit diesem Antigen oder Impfstoff;
  • JgM (+), JgG (- / +), JgA (- / +) - akuter pathologischer Prozess (höchstwahrscheinlich primär);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - der Prozess eines chronischen Verlaufs;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) - Rückfall;
  • JgM (-) - Stadium der Genesung.

Quantitative Werte sind mit einer großen Informationslast verbunden, aber nur der behandelnde Arzt kann sie basierend auf früheren Indikationen, dem Alter des Patienten und den Normen für jede spezifische Krankheit interpretieren. Aus diesem Grund können Sie die Ergebnisse nicht selbst bewerten..

Wie lange auf Ergebnisse warten

Diese Technik hat viele Varianten, je nachdem, welcher Zeitraum für den Empfang von Daten zur Verfügung steht. Die durchschnittliche Dauer der ELISA-Diagnose beträgt 4-6 Stunden, sodass Sie bereits am nächsten Tag Ergebnisse liefern können.

Die längsten Methoden dauern beispielsweise bei einer HIV-Infektion bis zu 10 Tage.

Im dringenden Bedarf ist die Verwendung von Expressmethoden möglich, bei denen die Antwort nach 1-2 Stunden eingeht.

Wo kann ich einen IFA-Test bekommen?

Da die Ausrüstung für diese Art der Diagnose ziemlich teuer ist, können nicht alle Labors sie erwerben. Darüber hinaus sind Tests, die bestimmte Antigene enthalten, nur begrenzt haltbar (normalerweise etwa 1 Jahr), sodass sie ständig aktualisiert werden müssen..

Aus diesen Gründen gibt es in staatlichen medizinischen Einrichtungen bei weitem nicht immer IFA-Labors. In den meisten Fällen müssen Sie sich an große private medizinische oder große Diagnosezentren wenden.

Um eine IFA-Studie durchführen zu können, muss das Labor über eine spezielle Lizenz verfügen, und Personal und Laborassistenten müssen eine spezielle Schulung absolvieren.

In den meisten Fällen wird vom Arzt ein bestimmtes Diagnosezentrum oder Labor empfohlen, das den Patienten zur Untersuchung überweist.

Enzymimmunoassay

Der Preis dieser Studie hängt von der Region des Landes und von der Ebene der Klinik ab, die die Dienstleistung erbringt. In Moskau beginnt der Mindestpreis für die Bestimmung eines Antigens bei 700 Rubel. Wenn mehrere Immunglobuline gleichzeitig identifiziert werden müssen, wird der Preis zusammengefasst.

Bei dringenden Analysen steigen die Kosten um 150-200 Rubel. für jedes Antigen.

Trotz der relativ hohen Kosten können Sie mit einem enzymgebundenen Immunosorbens-Assay die Patientenuntersuchung so informativ und schnell wie möglich gestalten, was die Zeit vor der Behandlung verkürzt und es Ihnen ermöglicht, den Zustand einer Person schnell zu stabilisieren.

Dieses Video zeigt den Film "Grundlagen des enzymgebundenen Immunosorbens-Assays"..

Enzymgebundener Immunosorbens-Assay (ELISA, ELISA). Die Essenz, das Prinzip der Methode und die Phasen der Studie. Analyse auf Antikörper, Antikörperklassen, Immunkomplex.

Im Zusammenhang mit der Entwicklung von Zelltechnologien, Molekularbiologie, Genetik, Physik, Chemie und einer Reihe anderer High-Tech-Disziplinen werden neue hochpräzise und High-Tech-Methoden in die tägliche Praxis eingeführt. Diese interdisziplinären Trends betreffen sowohl den Bereich des medizinischen Wissens als auch verwandte Bereiche biologischer, biochemischer Probleme. In den letzten zehn Jahren hat sich eine Methode der klinischen Labordiagnostik namens Enzymimmunoassay verbreitet und in die Massenpraxis eingeführt..

Im Allgemeinen sind Technologien für immunologische enzymatische und radiologische Reaktionen seit den frühen 80er Jahren des 20. Jahrhunderts bei der Typisierung von Zellen, Zellkulturen und verschiedenen Geweben weit verbreitet. Diese Methoden waren jedoch sehr zeitaufwändig, nicht einheitlich, nicht standardisiert, was ihre Verwendung für therapeutische und diagnostische Zwecke in Scharen ausschloss. Nur enge, hochtechnologische und hochspezialisierte Labors verwendeten diese Methoden..

Mit der Entwicklung von Technologie, Mikrotechnologie und der Herstellung verschiedener Biopolymermaterialien wurde es jedoch möglich, fertige Sätze von Enzymimmunoassay-Diagnostika herzustellen, die von Laboratorien medizinischer Einrichtungen mit breitem Profil verwendet werden können. ELISA wird häufig zur Diagnose aller Arten von Infektionen (Chlamydien, Syphilis, Cytomegalievirus, Toxoplasmose, Herpes usw.) verwendet, sowohl akute als auch chronische sowie latente Formen, die ohne klinische Symptome auftreten. Diese Methode wird auch zur Kontrolle chronischer Infektionen verwendet Krankheiten. Versuchen wir herauszufinden, was diese Methode ist und welche Prinzipien ihr zugrunde liegen.?

Enzymgebundene Immunosorbens-Assay-Komponenten - Immunantwort und enzymatische Reaktion

Was ist eine Immunantwort? Was ist ein Antikörper, Antigen?

Was ist eine Immunantwort? Was ist Antigen??
Zunächst werden wir analysieren, was Immunreaktionen sind. Immunreaktionen sind spezifische Reaktionen der Bindung eines Antigens an einen Antikörper unter Bildung eines Immunkomplexes. Was bedeutet das? Auf der Oberfläche jeder Zelle eines Organismus befinden sich spezielle Strukturen, die als Antigene bezeichnet werden. Antigene sind im Allgemeinen Moleküle, die Informationen über eine Zelle enthalten (ähnlich wie Informationen auf dem Abzeichen einer Person, die die Basisdaten dieser Person angeben)..

Einzel- und Speziesantigene - was ist das? Warum werden diese Antigene benötigt??

Es gibt einzelne Antigene, die nur diesem bestimmten Organismus eigen sind. Diese einzelnen Antigene sind für alle Menschen unterschiedlich, sie sind einander ähnlich, aber immer noch unterschiedlich. Zwei identische Kopien einzelner Antigene existieren in der Natur nicht!

Der zweite Haupttyp von Antigenen sind Speziesantigene, die einem bestimmten Typ von Lebewesen inhärent sind. Zum Beispiel hat eine Person ihr eigenes Speziesantigen, das allen Menschen gemeinsam ist, Mäuse haben ihr eigenes Mausspeziesantigen usw. Auf der Oberfläche jeder Zelle ist notwendigerweise ein spezifisches und individuelles Antigen vorhanden.

Speziesantigen wird von Zellen des Immunsystems verwendet, um "Freund oder Feind" zu identifizieren..

Wie die Antigenerkennung erfolgt?

Eine Immunzelle bindet an eine verdächtige Zelle und identifiziert ein einzelnes Antigen. Im Gedächtnis der Immunzelle wird „aufgezeichnet“, wie „ihr Antigen“ aussieht. Wenn also das Antigen einer verdächtigen Zelle mit der Beschreibung von „ihrem Antigen“ übereinstimmt, stellt diese Zelle ihres eigenen Organismus keine Gefahr dar. Dann "löst" sich die Immunzelle und geht. Und wenn das Antigen nicht mit der Beschreibung von "unserem" übereinstimmt, identifiziert die Immunzelle diese Zelle als "fremd", was bedeutet, dass sie möglicherweise für den gesamten Organismus gefährlich ist. In diesem Fall "löst" die Immunzelle nicht, sondern beginnt das gefährliche Objekt zu zerstören. Die Genauigkeit einer solchen immunologischen Erkennung ist erstaunlich - 99,97%. Es gibt praktisch keine Fehler!

Was ist ein Antikörper, Immunkomplex?
Und was ist ein Antikörper??

Ein Antikörper ist ein spezielles Molekül, das sich auf der Oberfläche einer Immunzelle befindet. Es ist der Antikörper, der an die Antigene der verdächtigen Zelle bindet. Ferner überträgt der Antikörper Informationen in die Zelle, in der die Erkennung stattfindet, und empfängt ein Rücksignal von zwei Arten von "eigenen" oder "fremden". Wenn das Signal "eigenen" Antikörper die Verbindung mit dem Antigen zerstört und die Zelle freisetzt.

Was ist der Immunkomplex??
Wenn das Signal „fremd“ ist, entwickelt sich die Situation anders. Der Antikörper unterbricht nicht die Verbindung mit dem Antigen, sondern sendet durch das Senden spezifischer Signale eine "Verstärkung". Biologisch bedeutet dies, dass andere Antikörper, die sich in einem anderen Teil der Zelle befinden, sich in den Bereich bewegen, von dem das Gefahrensignal stammt, und auch eine Verbindung zwischen sich und dem eingefangenen Antigen herstellen. Am Ende scheint das Antigen allseitig umgeben und fest gebunden zu sein. Ein solcher Antigen + Antikörper-Komplex wird als Immunkomplex bezeichnet. Ab diesem Moment beginnt die Antigenverwertung. Aber jetzt interessieren uns die Details des Antigenneutralisationsprozesses nicht mehr..

Arten von Antikörpern (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antikörper sind Proteinstrukturen, die dementsprechend einen chemischen Namen haben, der als Synonym für das Wort Antikörper verwendet wird. Antikörper = Immunglobuline.

Es gibt 5 Arten von Immunglobulinen (Ig), die an verschiedenen Stellen des menschlichen Körpers (z. B. auf der Haut, auf den Schleimhäuten, im Blut usw.) an verschiedene Arten von Antigenen binden. Das heißt, Antikörper haben eine Arbeitsteilung. Diese Immunglobuline werden Buchstaben des lateinischen Alphabets - A, M, G, D, E - genannt und wie folgt bezeichnet: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Bei der Diagnose wird nur ein Antikörpertyp verwendet, der in Bezug auf die bestimmte Mikrobe am spezifischsten ist. Das heißt, die Bindung dieses Antikörpertyps an das nachgewiesene Antigen erfolgt immer. Am häufigsten werden IgG und IgM verwendet.

Es ist dieses Prinzip der Immunantwort (die einzigartige Genauigkeit und Spezifität der Erkennung eines definierten biologischen Objekts), das dem Enzymimmunoassay zugrunde liegt. Aufgrund der hohen Genauigkeit von Antikörpern bei der Erkennung von Antigenen ist auch die Genauigkeit des gesamten Enzymimmunoassays am höchsten..

Enzymatische Reaktion

Was ist eine enzymatische Reaktion? Was ist Affinität, Substrat und Reaktionsprodukt?
Wir betrachten die enzymatische Reaktion bei der Methode des Enzymimmunoassays.

Was ist eine enzymatische Reaktion??

Eine enzymatische Reaktion ist eine chemische Reaktion, bei der eine Substanz durch die Wirkung eines Enzyms in eine andere umgewandelt wird. Die Substanz, auf die das Enzym einwirkt, wird als Substrat bezeichnet. Und die Substanz, die durch die Wirkung des Enzyms erhalten wird, wird als Reaktionsprodukt bezeichnet. Darüber hinaus ist die Besonderheit der enzymatischen Reaktion derart, dass ein bestimmtes Enzym nur auf ein bestimmtes Substrat wirkt. Diese Eigenschaft eines Enzyms, „sein“ Substrat zu erkennen, wird als Affinität bezeichnet..

Somit führt jedes Enzym nur eine spezifische Reaktion durch. In der biologischen Welt sind sehr viele Enzyme sowie enzymatische Reaktionen bekannt. Im Enzymimmunoassay werden nur wenige enzymatische Reaktionen verwendet - nicht mehr als 10. Gleichzeitig wurden enzymatische Reaktionen ausgewählt, deren Produkt farbige Substanzen sind. Warum sollten die Produkte der enzymatischen Reaktion gefärbt werden? Denn um die Konzentration einer Substanz aus einer farbigen Lösung zu berechnen, gibt es eine einfache chemische Methode - die Kolorimetrie.

Kolorimetriemethode - die Essenz und das Prinzip

Die Farbmetrik verwendet eine Messung der Farbdichte einer Lösung, und die Konzentration einer Substanz wird aus der Farbdichte berechnet. Ein spezielles Gerät, ein Kolorimeter, misst die Farbdichte einer Lösung. In der Kolorimetrie sind zwei Varianten der Abhängigkeit der Farbdichte von der Konzentration eines Stoffes möglich - dies ist eine direkt proportionale Abhängigkeit oder eine umgekehrt proportionale Abhängigkeit. Bei einer direkt proportionalen Abhängigkeit ist die Farbdichte der Lösung umso intensiver, je höher die Konzentration der Substanz ist. Wenn umgekehrt proportional, ist die Farbdichte der Lösung umso geringer, je höher die Konzentration der Substanz ist. Technisch geschieht dies wie folgt: Es werden mehrere Lösungen mit einer bekannten Konzentration einer Substanz genommen, die Dichte dieser Lösungen wird gemessen, ein Diagramm der Konzentration gegenüber der Farbdichte wird erstellt (Kalibrierungsdiagramm)..

Dann wird die Farbdichte der Lösung bestimmt, deren Konzentration bestimmt wird, und das Konzentrationsdiagramm, das dem Niveau der gemessenen Dichte der Farbe der Lösung entspricht, wird aus dem Kalibrierungsdiagramm ermittelt. In modernen automatischen Farbmessgeräten kalibrieren sie nur einmal, dann erstellt das Gerät selbst eine Kalibrierungskurve, die im Speicher des Geräts verbleibt, und geschieht automatisch.

Im Enzymimmunoassay werden am häufigsten die folgenden Enzyme verwendet: Peroxidase, alkalische Phosphatase, Avidin.

Wie werden immunologische und enzymatische Reaktionen in einem Enzymimmunoassay kombiniert? Nun werden wir den enzymgebundenen Immunosorbens-Assay selbst untersuchen. Welche Phasen umfasst es und was passiert während dieser Reaktionen? Der enzymgebundene Immunosorbens-Assay ist direkt und indirekt.

Enzymgebundener Immunosorbens-Assay - Stadien

In einem direkten enzymgebundenen Immunosorbens-Assay werden Antikörper gegen ein nachweisbares Antigen verwendet, das an eine spezifische Markierung gekoppelt ist. Diese spezifische Markierung ist das Substrat der enzymatischen Reaktion..

Die Anlagerung von Antigenen an die Oberfläche des Lochs und die Verbindung von Antigen mit Antikörper

Wie wird ein direkter Enzymimmunoassay durchgeführt? Biologisches Material (Blut, Schleimhautabkratzer, Abstriche) wird entnommen und in spezielle Löcher gegeben. Biologisches Material wird 15 bis 30 Minuten in den Vertiefungen belassen, damit die Antigene an der Oberfläche der Vertiefungen haften können. Als nächstes werden Antikörper gegen das nachweisbare Antigen in diese Vertiefungen gegeben. Dies bedeutet, dass beim Nachweis von Antigenen, beispielsweise Syphilis, Antikörper gegen Syphilis-Antigene hinzugefügt werden. Diese Antikörper werden industriell gewonnen und die Labors kaufen fertige Kits. Diese Mischung aus Testmaterial und Antikörpern bleibt einige Zeit (von 30 Minuten bis 4 bis 5 Stunden), damit die Antikörper ihr „eigenes“ Antigen finden und kontaktieren können. Eine Probe von Antigenen, je mehr Antikörper sie kontaktieren.

Entfernung von "überschüssigen" Antikörpern

Wie angegeben, sind Antikörper auch mit einer spezifischen Markierung assoziiert. Da Antikörper im Überschuss hinzugefügt werden, binden nicht alle an Antigene, und wenn die Probe kein Antigen enthält, bindet dementsprechend kein Antikörper an das gewünschte Antigen. Um die "zusätzlichen" Antikörper zu entfernen, wird der Inhalt der Vertiefungen einfach gegossen. Infolgedessen werden alle "zusätzlichen" Antikörper entfernt, und diejenigen, die an die Antigene binden, bleiben erhalten, da die Antigene an die Oberfläche der Vertiefungen "geklebt" werden. Die Vertiefungen werden mehrmals mit einer speziellen Lösung gespült, mit der Sie alle "zusätzlichen" Antikörper waschen können.

Enzymatische Reaktion - Bildung einer gefärbten Verbindung

Als nächstes beginnt die zweite Stufe - eine enzymatische Reaktion. Eine Enzymlösung wird zu den gewaschenen Vertiefungen gegeben und 30-60 Minuten stehen gelassen. Dieses Enzym hat eine Affinität zu der Substanz (spezifische Markierung), an die die Antikörper gebunden sind. Das Enzym führt eine Reaktion durch, wodurch sich diese spezifische Markierung (Substrat) in eine gefärbte Substanz (Produkt) verwandelt. Dann wird die Konzentration dieser gefärbten Substanz durch Kolorimetrie bestimmt. Da diese spezifische Markierung mit Antikörpern assoziiert ist, ist die Konzentration des gefärbten Reaktionsprodukts gleich der Konzentration von Antikörpern. Und die Konzentration von Antikörpern ist gleich der Konzentration von Antigenen. Als Ergebnis der Analyse erhalten wir die Antwort, wie hoch die Konzentration der nachgewiesenen Mikrobe oder des nachgewiesenen Hormons ist.

So findet ein direkter Enzymimmunoassay statt. Der indirekte enzymgebundene Immunosorbens-Assay wird heute jedoch häufiger verwendet, da die Empfindlichkeit und Genauigkeit des indirekten nicht höher ist als der direkte. Kommen wir also zu einem indirekten enzymgebundenen Immunosorbens-Assay.

Indirekter Enzymimmunoassay - Stadien des

Der indirekte Enzymimmunoassay besteht aus zwei Schritten. Während der ersten Stufe werden unmarkierte Antikörper gegen nachweisbare Antigene verwendet, und in der zweiten Stufe werden markierte Antikörper gegen die ersten unmarkierten Antikörper verwendet. Das heißt, es stellt sich keine direkte Bindung des Antikörpers an das Antigen heraus, sondern eine Doppelkontrolle: die Bindung von Antikörpern an das Antigen, wonach die Bindung der zweiten Antikörper an den Antikörper + Antigen-Komplex erfolgt. Antikörper für das erste Stadium sind in der Regel Mäuse und für das zweite Ziegen.

Fixierung von Antigenen auf der Oberfläche der Vertiefung und Bindung von Antigen an unmarkierten Antikörper
Neben dem direkten Enzymimmunoassay wird eine Probenahme von biologischem Material durchgeführt - Blut, Kratzer, Abstriche. Das untersuchte biologische Material wird in die Vertiefungen eingeführt und 15 bis 30 Minuten stehen gelassen, um Antigene an der Oberfläche der Vertiefungen zu haften. Dann werden unmarkierte Antikörper gegen Antigene in die Vertiefungen gegeben und für einen Zeitraum (1 bis 5 Stunden) belassen, so dass die Antikörper an „ihre“ Antigene binden und einen Immunkomplex bilden (erste Stufe). Entfernen Sie dann die "zusätzlichen", nicht gebundenen Antikörper, indem Sie den Inhalt der Löcher einfüllen. Mit einer speziellen Lösung spülen, um alle ungebundenen Antikörper vollständig zu entfernen.

Die Bindung von markierten Antikörpern an das komplexe Antigen + unmarkierten Antikörper
Dann nehmen sie die zweiten Antikörper - markiert, in die Vertiefungen gegeben und wieder einige Zeit stehen gelassen - 15 bis 30 Minuten (zweite Stufe). Während dieser Zeit binden markierte Antikörper an das erste - nicht markierte - und bilden einen Komplex - Antikörper + Antikörper + Antigen. In den Vertiefungen werden jedoch sowohl markierte als auch nicht markierte Antikörper im Überschuss zugesetzt. Daher ist es erneut erforderlich, die "zusätzlichen", bereits markierten Antikörper zu entfernen, die nicht an nicht markierte Antikörper gebunden haben. Wiederholen Sie dazu den Inhalt der Löcher und waschen Sie mit einer speziellen Lösung.

Enzymatische Reaktion - Bildung einer gefärbten Verbindung
Danach wird ein Enzym eingeführt, das die Reaktion der Umwandlung der "Markierung" in eine farbige Substanz ausführt. Die Färbung entwickelt sich innerhalb von 5-30 Minuten. Dann wird eine Kolorimetrie durchgeführt und die Konzentration der gefärbten Substanz berechnet. Da die Konzentration der gefärbten Substanz gleich der Konzentration an markierten Antikörpern ist und die Konzentration an markierten Antikörpern gleich der Konzentration an nicht markierten Antikörpern ist, die wiederum gleich der Konzentration an Antigen ist. Somit erhalten wir die Konzentration an nachweisbarem Antigen.
Eine solche Doppelkontrolle in Form der Verwendung von zwei Arten von Antikörpern ermöglichte es, die Empfindlichkeit und Spezifität des Enzymimmunoassay-Verfahrens zu erhöhen. Trotz der Verlängerung der Analysezeit und der Einbeziehung zusätzlicher Schritte werden diese Verluste durch die Genauigkeit des Ergebnisses kompensiert. Aus diesem Grund ist derzeit die überwiegende Mehrheit der Enzymimmunoassay-Methoden ein indirekter Enzymimmunoassay.


Welche Krankheiten werden durch Enzymimmunoassay erkannt??

Wir werden weiter überlegen, welche Krankheiten und welche biologisch aktiven Substanzen durch einen enzymgebundenen Immunosorbens-Assay nachgewiesen werden. Substanzen, die durch einen Enzymimmunoassay nachgewiesen wurden, sind in der Tabelle dargestellt.

Literatur Zu Dem Herzrhythmus

Weiße Blutkörperchen bei Erwachsenen: Normen und Ursachen von Fehlfunktionen

Auf dem menschlichen Körper und den umgebenden Objekten befinden sich viele Bakterien, Krankheitserreger verschiedener Krankheiten.

Wie man zu Hause schnell den Bluthochdruck senkt

Bluthochdruck und Druckstöße sind eines der häufigsten Probleme, die jedes Jahr jünger werden. Es gibt viele Gründe für sein Auftreten - von einer genetischen Veranlagung und täglichem Stress bis hin zu groben Verstößen gegen die Ernährung und geringer körperlicher Aktivität.